生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
11期
216-220
,共5页
张国华%洪文荣%沈剑锋%樊伟明
張國華%洪文榮%瀋劍鋒%樊偉明
장국화%홍문영%침검봉%번위명
DNA重组%分子遗传学%依纽小单孢菌%sisI基因
DNA重組%分子遺傳學%依紐小單孢菌%sisI基因
DNA중조%분자유전학%의뉴소단포균%sisI기인
以依纽小单孢菌HP变种基因组DNA为模板,扩增位于西索米星3′,4′-双脱羟基酶基因sisI上下游序列的两端同源交换臂,在两臂之间添加抗性筛选标记ermE基因,并在该基因上游加入组成型强启动子ermE*,以强化筛选标记.将该外源DNA序列插入到质粒pKC1139,构建重组质粒pFD57.转化大肠杆菌ET12567后,经接合转移导入依纽小单孢菌中,经抗性筛选得到两株阳性菌株,命名为HP-I-1和HP-I-2.经PCR验证和测序,结果表明,重组质粒已整合到染色体DNA上.依纽小单孢菌接合转移体系的构建达到了预期目的,并实现了对该体系的优化.
以依紐小單孢菌HP變種基因組DNA為模闆,擴增位于西索米星3′,4′-雙脫羥基酶基因sisI上下遊序列的兩耑同源交換臂,在兩臂之間添加抗性篩選標記ermE基因,併在該基因上遊加入組成型彊啟動子ermE*,以彊化篩選標記.將該外源DNA序列插入到質粒pKC1139,構建重組質粒pFD57.轉化大腸桿菌ET12567後,經接閤轉移導入依紐小單孢菌中,經抗性篩選得到兩株暘性菌株,命名為HP-I-1和HP-I-2.經PCR驗證和測序,結果錶明,重組質粒已整閤到染色體DNA上.依紐小單孢菌接閤轉移體繫的構建達到瞭預期目的,併實現瞭對該體繫的優化.
이의뉴소단포균HP변충기인조DNA위모판,확증위우서색미성3′,4′-쌍탈간기매기인sisI상하유서렬적량단동원교환비,재량비지간첨가항성사선표기ermE기인,병재해기인상유가입조성형강계동자ermE*,이강화사선표기.장해외원DNA서렬삽입도질립pKC1139,구건중조질립pFD57.전화대장간균ET12567후,경접합전이도입의뉴소단포균중,경항성사선득도량주양성균주,명명위HP-I-1화HP-I-2.경PCR험증화측서,결과표명,중조질립이정합도염색체DNA상.의뉴소단포균접합전이체계적구건체도료예기목적,병실현료대해체계적우화.
