同济大学学报（医学版）
同濟大學學報（醫學版）
동제대학학보（의학판）
JOURNAL OF TONGJI UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE)
2012年
4期
1-6
,共6页
戴天耘%尹艳林%刘威威%戴亚蕾
戴天耘%尹豔林%劉威威%戴亞蕾
대천운%윤염림%류위위%대아뢰
细胞因子信号转导负调控蛋白3%基因克隆%真核表达%信号转导和转录激活因子3
細胞因子信號轉導負調控蛋白3%基因剋隆%真覈錶達%信號轉導和轉錄激活因子3
세포인자신호전도부조공단백3%기인극륭%진핵표체%신호전도화전록격활인자3
目的 建立体外高表达细胞因子信号转导负调控蛋白3( suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的细胞模型,为进一步研究SOCS3在炎症因子信号通路中的作用机制提供研究手段.方法 通过RT-PCR克隆SOCS3的编码片段,连接至pIRES2-EGFP真核表达质粒,经测序鉴定后,转染至293T细胞.通过荧光显微镜观测转染效率,RT-PCR和Western印迹法检测SOCS3表达情况,同时检测SOCS3高表达对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的信号转导和转录激活因子3 (signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)磷酸化的影响.结果 经测序证实,pIRES2-EGFP-SOCS3重建质粒中的SOCS3序列完全正确,转染后细胞中可见明显绿色荧光,且SOCS3在mRNA和蛋白水平表达均显著增加,过表达SOCS3可显著抑制由LPS诱导的STAT3的磷酸化.结论 成功构建SOCS3基因重组质粒,转染293T细胞,获得高表达具有功能性SOCS3分子.该细胞模型建立为进一步研究SOCS3的调节机制提供了有利工具.
目的 建立體外高錶達細胞因子信號轉導負調控蛋白3( suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的細胞模型,為進一步研究SOCS3在炎癥因子信號通路中的作用機製提供研究手段.方法 通過RT-PCR剋隆SOCS3的編碼片段,連接至pIRES2-EGFP真覈錶達質粒,經測序鑒定後,轉染至293T細胞.通過熒光顯微鏡觀測轉染效率,RT-PCR和Western印跡法檢測SOCS3錶達情況,同時檢測SOCS3高錶達對脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)誘導的信號轉導和轉錄激活因子3 (signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)燐痠化的影響.結果 經測序證實,pIRES2-EGFP-SOCS3重建質粒中的SOCS3序列完全正確,轉染後細胞中可見明顯綠色熒光,且SOCS3在mRNA和蛋白水平錶達均顯著增加,過錶達SOCS3可顯著抑製由LPS誘導的STAT3的燐痠化.結論 成功構建SOCS3基因重組質粒,轉染293T細胞,穫得高錶達具有功能性SOCS3分子.該細胞模型建立為進一步研究SOCS3的調節機製提供瞭有利工具.
목적 건입체외고표체세포인자신호전도부조공단백3( suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)적세포모형,위진일보연구SOCS3재염증인자신호통로중적작용궤제제공연구수단.방법 통과RT-PCR극륭SOCS3적편마편단,련접지pIRES2-EGFP진핵표체질립,경측서감정후,전염지293T세포.통과형광현미경관측전염효솔,RT-PCR화Western인적법검측SOCS3표체정황,동시검측SOCS3고표체대지다당(lipopolysaccharides,LPS)유도적신호전도화전록격활인자3 (signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)린산화적영향.결과 경측서증실,pIRES2-EGFP-SOCS3중건질립중적SOCS3서렬완전정학,전염후세포중가견명현록색형광,차SOCS3재mRNA화단백수평표체균현저증가,과표체SOCS3가현저억제유LPS유도적STAT3적린산화.결론 성공구건SOCS3기인중조질립,전염293T세포,획득고표체구유공능성SOCS3분자.해세포모형건립위진일보연구SOCS3적조절궤제제공료유리공구.
