中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2012年
27期
199-203
,共5页
拮抗酵母%总RNA提取%改良的SDS法
拮抗酵母%總RNA提取%改良的SDS法
길항효모%총RNA제취%개량적SDS법
为了探索提取拮抗膜醭毕赤酵母(Pichia membranefaciens)总RNA的理想方法,以拮抗膜醭毕赤酵母(Pichia membranefaciens)菌株为实验材料,用改良的SDS法、Trizol试剂法和十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法分别对其进行了总RNA的提取,并利用紫外分光光度计法、凝胶电泳法和反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)比较3种不同提取方法获得的总RNA质量和产率.结果表明:改良SDS法提取的总RNA具有较高的质量,OD260/OD280比值为1.980,并且OD260/OD230为2.054.凝胶电泳结果表明,改良的SDS法有28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA 3条清晰的条带,且很少降解,28S rRNA与18S rRNA亮度比约为2∶1；RT-PCR能清楚扩增到特异条带,进一步证实了改良的SDS法提取拮抗酵母膜醭毕赤菌株的总RNA质量最好；CTAB法获得的总RNA质量也较好,只是28S rRNA与18S rRNA亮度比差异不明显；Trizol试剂法提取的RNA质量最差,RNA降解多,总RNA不完整,并有DNA污染.
為瞭探索提取拮抗膜醭畢赤酵母(Pichia membranefaciens)總RNA的理想方法,以拮抗膜醭畢赤酵母(Pichia membranefaciens)菌株為實驗材料,用改良的SDS法、Trizol試劑法和十六烷基三乙基溴化銨(CTAB)法分彆對其進行瞭總RNA的提取,併利用紫外分光光度計法、凝膠電泳法和反轉錄聚閤酶鏈式反應(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)比較3種不同提取方法穫得的總RNA質量和產率.結果錶明:改良SDS法提取的總RNA具有較高的質量,OD260/OD280比值為1.980,併且OD260/OD230為2.054.凝膠電泳結果錶明,改良的SDS法有28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA 3條清晰的條帶,且很少降解,28S rRNA與18S rRNA亮度比約為2∶1；RT-PCR能清楚擴增到特異條帶,進一步證實瞭改良的SDS法提取拮抗酵母膜醭畢赤菌株的總RNA質量最好；CTAB法穫得的總RNA質量也較好,隻是28S rRNA與18S rRNA亮度比差異不明顯；Trizol試劑法提取的RNA質量最差,RNA降解多,總RNA不完整,併有DNA汙染.
위료탐색제취길항막복필적효모(Pichia membranefaciens)총RNA적이상방법,이길항막복필적효모(Pichia membranefaciens)균주위실험재료,용개량적SDS법、Trizol시제법화십륙완기삼을기추화안(CTAB)법분별대기진행료총RNA적제취,병이용자외분광광도계법、응효전영법화반전록취합매련식반응(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)비교3충불동제취방법획득적총RNA질량화산솔.결과표명:개량SDS법제취적총RNA구유교고적질량,OD260/OD280비치위1.980,병차OD260/OD230위2.054.응효전영결과표명,개량적SDS법유28S rRNA、18S rRNA화5S rRNA 3조청석적조대,차흔소강해,28S rRNA여18S rRNA량도비약위2∶1；RT-PCR능청초확증도특이조대,진일보증실료개량적SDS법제취길항효모막복필적균주적총RNA질량최호；CTAB법획득적총RNA질량야교호,지시28S rRNA여18S rRNA량도비차이불명현；Trizol시제법제취적RNA질량최차,RNA강해다,총RNA불완정,병유DNA오염.
