现代免疫学
現代免疫學
현대면역학
CURRENT IMMUNOLOGY
2005年
6期
461-464
,共4页
张玥%孙宏彬%谈意隽%季育华
張玥%孫宏彬%談意雋%季育華
장모%손굉빈%담의준%계육화
人巨细胞病毒%pp65%核酸疫苗%细胞免疫
人巨細胞病毒%pp65%覈痠疫苗%細胞免疫
인거세포병독%pp65%핵산역묘%세포면역
构建真核重组表达质粒PVAX1-pp65,通过对其表达产物的鉴定和免疫小鼠实验,探讨PVAX1-pp65载体对诱导免疫应答的效果及方式.用已构建的原核表达载体pp65-pet32a,经酶切后与DNA疫苗载体PVAX1连接,构建HCMVpp65核酸疫苗(PVAX1-pp65).用脂质体法将其转染293细胞,经间接免疫荧光、免疫印迹试验来验证其表达的产物.同时,免疫小鼠后取其脾脏细胞,经流式细胞仪检测其CD4+和CD8+T细胞;并利用MTT法测定免疫小鼠的T细胞对ConA和重组pp65蛋白刺激后的增殖活性.结果显示构建的真核表达载体PVAX1-pp65,经测序验证其序列正确.体外转染实验结果表明转染重组质粒的细胞胞浆内呈现与特异性pp65单克隆抗体反应的颗粒状荧光产物,免疫印迹试验也显示重组质粒转染的细胞裂解物中有pp65蛋白条带.另外,免疫小鼠脾CD8+T细胞的含量明显高于对照组;免疫鼠脾细胞对重组pp65抗原蛋白的刺激后增殖反应明显.综上结果证实,成功地构建了HCMVpp65核酸疫苗,并能有效地表达,表达的蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性.HCMVpp65 DNA疫苗可诱导小鼠产生针对HCMV的特异性细胞免疫应答,可作为一种有应用前景的核酸疫苗进一步深入研究.
構建真覈重組錶達質粒PVAX1-pp65,通過對其錶達產物的鑒定和免疫小鼠實驗,探討PVAX1-pp65載體對誘導免疫應答的效果及方式.用已構建的原覈錶達載體pp65-pet32a,經酶切後與DNA疫苗載體PVAX1連接,構建HCMVpp65覈痠疫苗(PVAX1-pp65).用脂質體法將其轉染293細胞,經間接免疫熒光、免疫印跡試驗來驗證其錶達的產物.同時,免疫小鼠後取其脾髒細胞,經流式細胞儀檢測其CD4+和CD8+T細胞;併利用MTT法測定免疫小鼠的T細胞對ConA和重組pp65蛋白刺激後的增殖活性.結果顯示構建的真覈錶達載體PVAX1-pp65,經測序驗證其序列正確.體外轉染實驗結果錶明轉染重組質粒的細胞胞漿內呈現與特異性pp65單剋隆抗體反應的顆粒狀熒光產物,免疫印跡試驗也顯示重組質粒轉染的細胞裂解物中有pp65蛋白條帶.另外,免疫小鼠脾CD8+T細胞的含量明顯高于對照組;免疫鼠脾細胞對重組pp65抗原蛋白的刺激後增殖反應明顯.綜上結果證實,成功地構建瞭HCMVpp65覈痠疫苗,併能有效地錶達,錶達的蛋白具有良好的免疫原性和免疫反應性.HCMVpp65 DNA疫苗可誘導小鼠產生針對HCMV的特異性細胞免疫應答,可作為一種有應用前景的覈痠疫苗進一步深入研究.
구건진핵중조표체질립PVAX1-pp65,통과대기표체산물적감정화면역소서실험,탐토PVAX1-pp65재체대유도면역응답적효과급방식.용이구건적원핵표체재체pp65-pet32a,경매절후여DNA역묘재체PVAX1련접,구건HCMVpp65핵산역묘(PVAX1-pp65).용지질체법장기전염293세포,경간접면역형광、면역인적시험래험증기표체적산물.동시,면역소서후취기비장세포,경류식세포의검측기CD4+화CD8+T세포;병이용MTT법측정면역소서적T세포대ConA화중조pp65단백자격후적증식활성.결과현시구건적진핵표체재체PVAX1-pp65,경측서험증기서렬정학.체외전염실험결과표명전염중조질립적세포포장내정현여특이성pp65단극륭항체반응적과립상형광산물,면역인적시험야현시중조질립전염적세포렬해물중유pp65단백조대.령외,면역소서비CD8+T세포적함량명현고우대조조;면역서비세포대중조pp65항원단백적자격후증식반응명현.종상결과증실,성공지구건료HCMVpp65핵산역묘,병능유효지표체,표체적단백구유량호적면역원성화면역반응성.HCMVpp65 DNA역묘가유도소서산생침대HCMV적특이성세포면역응답,가작위일충유응용전경적핵산역묘진일보심입연구.
