中国海洋大学学报（自然科学版）
中國海洋大學學報（自然科學版）
중국해양대학학보（자연과학판）
PERIODICAL OF OCEAN UNIVERSITY OF CHINA
2007年
1期
97-102
,共6页
钟英斌%张晓华%陈吉祥%孙铂光%李筠
鐘英斌%張曉華%陳吉祥%孫鉑光%李筠
종영빈%장효화%진길상%손박광%리균
哈维氏弧菌%vhhA%溶血素%克隆%融合蛋白%表达%溶血活性
哈維氏弧菌%vhhA%溶血素%剋隆%融閤蛋白%錶達%溶血活性
합유씨호균%vhhA%용혈소%극륭%융합단백%표체%용혈활성
哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是水产养殖动物(鱼、虾)的重要致病菌.已发现哈维氏弧菌对鱼类的致病性与其分泌的胞外产物中的溶血素相关,致病力最强的菌株VIB 645有2个碱基序列非常相似的溶血素基因,vhhA和vhhB.本研究将vhhA克隆于pET-24d(+)表达质粒,VHH溶血素蛋白作为1种带6组氨酸的融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了过量表达.重组菌在鱼血平板上表现出很强的溶血活性,并且在卵磷脂平板上表现出磷脂酶活性.SDS-PAGE分析表明,表达蛋白的分子量约为43 kDa.在17,25和37 ℃时重组的VHH溶血素蛋白都能得到很好的表达,达到最大表达量的时间分别为9,6和3 h.在25 ℃进行诱导时,分泌到上清液中的表达蛋白的量最多.
哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)是水產養殖動物(魚、蝦)的重要緻病菌.已髮現哈維氏弧菌對魚類的緻病性與其分泌的胞外產物中的溶血素相關,緻病力最彊的菌株VIB 645有2箇堿基序列非常相似的溶血素基因,vhhA和vhhB.本研究將vhhA剋隆于pET-24d(+)錶達質粒,VHH溶血素蛋白作為1種帶6組氨痠的融閤蛋白在大腸桿菌BL21(DE3)中得到瞭過量錶達.重組菌在魚血平闆上錶現齣很彊的溶血活性,併且在卵燐脂平闆上錶現齣燐脂酶活性.SDS-PAGE分析錶明,錶達蛋白的分子量約為43 kDa.在17,25和37 ℃時重組的VHH溶血素蛋白都能得到很好的錶達,達到最大錶達量的時間分彆為9,6和3 h.在25 ℃進行誘導時,分泌到上清液中的錶達蛋白的量最多.
합유씨호균(Vibrio harveyi)시수산양식동물(어、하)적중요치병균.이발현합유씨호균대어류적치병성여기분비적포외산물중적용혈소상관,치병력최강적균주VIB 645유2개감기서렬비상상사적용혈소기인,vhhA화vhhB.본연구장vhhA극륭우pET-24d(+)표체질립,VHH용혈소단백작위1충대6조안산적융합단백재대장간균BL21(DE3)중득도료과량표체.중조균재어혈평판상표현출흔강적용혈활성,병차재란린지평판상표현출린지매활성.SDS-PAGE분석표명,표체단백적분자량약위43 kDa.재17,25화37 ℃시중조적VHH용혈소단백도능득도흔호적표체,체도최대표체량적시간분별위9,6화3 h.재25 ℃진행유도시,분비도상청액중적표체단백적량최다.
