四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2007年
1期
84-87
,共4页
李薇%冯云%吕小岩%黎静宜%冉玉平
李薇%馮雲%呂小巖%黎靜宜%冉玉平
리미%풍운%려소암%려정의%염옥평
桥粒芯糖蛋白4天疱疮%克隆%融合蛋白%免疫识别
橋粒芯糖蛋白4天皰瘡%剋隆%融閤蛋白%免疫識彆
교립심당단백4천포창%극륭%융합단백%면역식별
目的 扩增人皮肤组织桥粒芯糖蛋白4(desmoglein 4,Dsg4)胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4的核酸序列,为寻常型天疱疮(pemphigus vulgaris, PV)发病机制的研究提供依据.方法 根据GenBank中的Dsg4序列(登录号为AY177664)分析,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法从人正常皮肤组织中抽提RNA,逆转录合成cDNA,聚合酶链反应(PCR)扩增皮肤组织桥粒芯糖蛋白4胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4目的基因;应用基因重组技术将目的基因分别与质粒pET32a在T4 DNA连接酶作用下相连接,转化E.coli DH5α感受态细菌,用含氨苄青霉素的LB培养基平板筛选转化菌,阳性重组子DNA序列测定鉴定;重组融合蛋白经ELISA法与PV患者、正常对照组血清进行反应.结果 RT-PCR扩增产物经凝胶电泳得到均约为350 bp的4条条带;质粒载体pET32a连接的目的基因经序列测定后与在GenBank登录的Dsg4胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4核酸序列完全一致,4个Dsg4胞外区域cDNA读码框架正确;Dsg4 EC1、EC2、EC3和EC4与患者血清反应,而不与正常对照组血清反应.结论 Dsg4胞外区域多肽片断在PV发病中可能有作用.
目的 擴增人皮膚組織橋粒芯糖蛋白4(desmoglein 4,Dsg4)胞外區域EC1、EC2、EC3和EC4的覈痠序列,為尋常型天皰瘡(pemphigus vulgaris, PV)髮病機製的研究提供依據.方法 根據GenBank中的Dsg4序列(登錄號為AY177664)分析,通過逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)法從人正常皮膚組織中抽提RNA,逆轉錄閤成cDNA,聚閤酶鏈反應(PCR)擴增皮膚組織橋粒芯糖蛋白4胞外區域EC1、EC2、EC3和EC4目的基因;應用基因重組技術將目的基因分彆與質粒pET32a在T4 DNA連接酶作用下相連接,轉化E.coli DH5α感受態細菌,用含氨芐青黴素的LB培養基平闆篩選轉化菌,暘性重組子DNA序列測定鑒定;重組融閤蛋白經ELISA法與PV患者、正常對照組血清進行反應.結果 RT-PCR擴增產物經凝膠電泳得到均約為350 bp的4條條帶;質粒載體pET32a連接的目的基因經序列測定後與在GenBank登錄的Dsg4胞外區域EC1、EC2、EC3和EC4覈痠序列完全一緻,4箇Dsg4胞外區域cDNA讀碼框架正確;Dsg4 EC1、EC2、EC3和EC4與患者血清反應,而不與正常對照組血清反應.結論 Dsg4胞外區域多肽片斷在PV髮病中可能有作用.
목적 확증인피부조직교립심당단백4(desmoglein 4,Dsg4)포외구역EC1、EC2、EC3화EC4적핵산서렬,위심상형천포창(pemphigus vulgaris, PV)발병궤제적연구제공의거.방법 근거GenBank중적Dsg4서렬(등록호위AY177664)분석,통과역전록취합매련반응(RT-PCR)법종인정상피부조직중추제RNA,역전록합성cDNA,취합매련반응(PCR)확증피부조직교립심당단백4포외구역EC1、EC2、EC3화EC4목적기인;응용기인중조기술장목적기인분별여질립pET32a재T4 DNA련접매작용하상련접,전화E.coli DH5α감수태세균,용함안변청매소적LB배양기평판사선전화균,양성중조자DNA서렬측정감정;중조융합단백경ELISA법여PV환자、정상대조조혈청진행반응.결과 RT-PCR확증산물경응효전영득도균약위350 bp적4조조대;질립재체pET32a련접적목적기인경서렬측정후여재GenBank등록적Dsg4포외구역EC1、EC2、EC3화EC4핵산서렬완전일치,4개Dsg4포외구역cDNA독마광가정학;Dsg4 EC1、EC2、EC3화EC4여환자혈청반응,이불여정상대조조혈청반응.결론 Dsg4포외구역다태편단재PV발병중가능유작용.
