细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
2期
110-112,116
,共4页
涂向东%吴玉水%邱龙翔%连云宗%程烽%兰风华%朱忠勇
塗嚮東%吳玉水%邱龍翔%連雲宗%程烽%蘭風華%硃忠勇
도향동%오옥수%구룡상%련운종%정봉%란풍화%주충용
EB病毒%gp85 N端片段%表达%免疫原性
EB病毒%gp85 N耑片段%錶達%免疫原性
EB병독%gp85 N단편단%표체%면역원성
目的:构建EB病毒基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.分析非糖基化的EB病毒包膜糖蛋白gp85 N端截短片段的抗原性.方法:采用基因工程技术,以B95-8细胞(美洲绒猴外周血B淋巴细胞经EBV转化后的细胞系)[1]培养上清为模板,用 PCR扩增EB病毒的BXLF2基因N端片段.PCR产物经Hind Ⅲ和XhoⅠ双酶切,插入原核表达载体pGEX-5T中,构建pGEX5T-85N重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21中诱导表达gp85N蛋白.纯化表达的蛋白用Western blot鉴定,并免疫BALB/c小鼠.结果:序列分析表明,插入片段的序列与GenBank登录的参考序列完全一致.重组表达的蛋白的相对分子质量(Mr)约为45000,同预期的大小相符.以纯化的可溶性重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测获得了高效价的抗血清,且抗gp85单克隆抗体(mAb)可识别所表达的gp85N抗原.Western blot显示,该抗原可与小鼠免疫血清起特异性反应.结论:表达并纯化的EB病毒截短的gp85N重组蛋白具有良好的抗原性,为下一步分析所产生抗体的生物学特性提供了条件.
目的:構建EB病毒基因的原覈錶達載體,併在大腸桿菌中進行錶達.分析非糖基化的EB病毒包膜糖蛋白gp85 N耑截短片段的抗原性.方法:採用基因工程技術,以B95-8細胞(美洲絨猴外週血B淋巴細胞經EBV轉化後的細胞繫)[1]培養上清為模闆,用 PCR擴增EB病毒的BXLF2基因N耑片段.PCR產物經Hind Ⅲ和XhoⅠ雙酶切,插入原覈錶達載體pGEX-5T中,構建pGEX5T-85N重組錶達質粒,併在大腸桿菌BL21中誘導錶達gp85N蛋白.純化錶達的蛋白用Western blot鑒定,併免疫BALB/c小鼠.結果:序列分析錶明,插入片段的序列與GenBank登錄的參攷序列完全一緻.重組錶達的蛋白的相對分子質量(Mr)約為45000,同預期的大小相符.以純化的可溶性重組蛋白免疫BALB/c小鼠,經ELISA檢測穫得瞭高效價的抗血清,且抗gp85單剋隆抗體(mAb)可識彆所錶達的gp85N抗原.Western blot顯示,該抗原可與小鼠免疫血清起特異性反應.結論:錶達併純化的EB病毒截短的gp85N重組蛋白具有良好的抗原性,為下一步分析所產生抗體的生物學特性提供瞭條件.
목적:구건EB병독기인적원핵표체재체,병재대장간균중진행표체.분석비당기화적EB병독포막당단백gp85 N단절단편단적항원성.방법:채용기인공정기술,이B95-8세포(미주융후외주혈B림파세포경EBV전화후적세포계)[1]배양상청위모판,용 PCR확증EB병독적BXLF2기인N단편단.PCR산물경Hind Ⅲ화XhoⅠ쌍매절,삽입원핵표체재체pGEX-5T중,구건pGEX5T-85N중조표체질립,병재대장간균BL21중유도표체gp85N단백.순화표체적단백용Western blot감정,병면역BALB/c소서.결과:서렬분석표명,삽입편단적서렬여GenBank등록적삼고서렬완전일치.중조표체적단백적상대분자질량(Mr)약위45000,동예기적대소상부.이순화적가용성중조단백면역BALB/c소서,경ELISA검측획득료고효개적항혈청,차항gp85단극륭항체(mAb)가식별소표체적gp85N항원.Western blot현시,해항원가여소서면역혈청기특이성반응.결론:표체병순화적EB병독절단적gp85N중조단백구유량호적항원성,위하일보분석소산생항체적생물학특성제공료조건.
