水生生物学报
水生生物學報
수생생물학보
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
2008年
1期
68-73
,共6页
可小丽%汪建国%顾泽茂%李明%龚小宁
可小麗%汪建國%顧澤茂%李明%龔小寧
가소려%왕건국%고택무%리명%공소저
水霉菌%DNA提取%溶菌酶%十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)%尿素%十二烷基硫酸钠(SDS)
水黴菌%DNA提取%溶菌酶%十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)%尿素%十二烷基硫痠鈉(SDS)
수매균%DNA제취%용균매%십륙완기삼갑기추화안(CTAB)%뇨소%십이완기류산납(SDS)
本实验采用EP管反复冻融和研磨的破壁方式,利用溶菌酶法、CTAB法、改良CTAB法、尿素法、十二烷基硫酸钠(SDS)法等5种方法,分别对5种鱼类致病性水霉菌(寄生水霉、多子水霉、异株水霉及两未定种)的基因组DNA进行提取,并采用紫外分光光度计和ITS区基因(包括5.8S rDNA)PCR扩增对DNA进行了评价.紫外分光光度计检测结果表明,5种方法均可提取到水霉菌DNA,其中改良CTAB法提取的5种水霉菌的DNA产量和质量最高,A260/A280在1.79-1.82之间,浓度为45μg/mL;PCR检测结果表明,只有改良CTAB法提取的DNA全部扩增到明亮、整齐、无拖尾的特异性条带,其他几种方法均存在暗带或无带现象.因此,改良CTAB法可以作为水霉菌DNA提取以开展分子生物学研究的首选方法.
本實驗採用EP管反複凍融和研磨的破壁方式,利用溶菌酶法、CTAB法、改良CTAB法、尿素法、十二烷基硫痠鈉(SDS)法等5種方法,分彆對5種魚類緻病性水黴菌(寄生水黴、多子水黴、異株水黴及兩未定種)的基因組DNA進行提取,併採用紫外分光光度計和ITS區基因(包括5.8S rDNA)PCR擴增對DNA進行瞭評價.紫外分光光度計檢測結果錶明,5種方法均可提取到水黴菌DNA,其中改良CTAB法提取的5種水黴菌的DNA產量和質量最高,A260/A280在1.79-1.82之間,濃度為45μg/mL;PCR檢測結果錶明,隻有改良CTAB法提取的DNA全部擴增到明亮、整齊、無拖尾的特異性條帶,其他幾種方法均存在暗帶或無帶現象.因此,改良CTAB法可以作為水黴菌DNA提取以開展分子生物學研究的首選方法.
본실험채용EP관반복동융화연마적파벽방식,이용용균매법、CTAB법、개량CTAB법、뇨소법、십이완기류산납(SDS)법등5충방법,분별대5충어류치병성수매균(기생수매、다자수매、이주수매급량미정충)적기인조DNA진행제취,병채용자외분광광도계화ITS구기인(포괄5.8S rDNA)PCR확증대DNA진행료평개.자외분광광도계검측결과표명,5충방법균가제취도수매균DNA,기중개량CTAB법제취적5충수매균적DNA산량화질량최고,A260/A280재1.79-1.82지간,농도위45μg/mL;PCR검측결과표명,지유개량CTAB법제취적DNA전부확증도명량、정제、무타미적특이성조대,기타궤충방법균존재암대혹무대현상.인차,개량CTAB법가이작위수매균DNA제취이개전분자생물학연구적수선방법.
