第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2008年
11期
1021-1024
,共4页
李劲%宋波%杨劲%陈志文%位全芳
李勁%宋波%楊勁%陳誌文%位全芳
리경%송파%양경%진지문%위전방
Tet-on控制系统%质粒%转录%SupF突变报告基因%Luciferase基因%顺铂%突变频率%突变频谱
Tet-on控製繫統%質粒%轉錄%SupF突變報告基因%Luciferase基因%順鉑%突變頻率%突變頻譜
Tet-on공제계통%질립%전록%SupF돌변보고기인%Luciferase기인%순박%돌변빈솔%돌변빈보
目的 研究TCR在顺铂导致的细胞内DNA损伤和突变过程中的分子机制,并为进一步研究转录偶联修复与突变发生的分子机制提供重要分子生物学依据.方法 首先将SupF突变报告基因克隆到带有双向真核启动子的含有Tet调控元件TRE的表达载体pBI-L的多克隆位点(MCS)上,获得pTCR-1,再将SV40ori元件插入pTCR-1载体,最终获得pTCR-2质粒.酶切和DNA测序证实后,用顺铂将pTCR-2进行体外DNA损伤后瞬时转染至Tet-on 293细胞,在Dox诱导下培养48 h,从细胞内提取质粒,纯化后转化SY204菌株,蓝白斑筛选挑取白色突变斑,计算突变频率并进行DNA测序检测突变频谱.结果 经酶切鉴定和测序分析,插入片段长度和序列正确.在Dox诱导下取得了SupF报告基因在转录偶联修复途径中的突变频率与频谱.结论 重组的pTCR-2质粒具有在真核细胞中Tet启动的转录活性,应用于顺铂致突变研究中,使转录条件下的突变情况能够得以反映.
目的 研究TCR在順鉑導緻的細胞內DNA損傷和突變過程中的分子機製,併為進一步研究轉錄偶聯脩複與突變髮生的分子機製提供重要分子生物學依據.方法 首先將SupF突變報告基因剋隆到帶有雙嚮真覈啟動子的含有Tet調控元件TRE的錶達載體pBI-L的多剋隆位點(MCS)上,穫得pTCR-1,再將SV40ori元件插入pTCR-1載體,最終穫得pTCR-2質粒.酶切和DNA測序證實後,用順鉑將pTCR-2進行體外DNA損傷後瞬時轉染至Tet-on 293細胞,在Dox誘導下培養48 h,從細胞內提取質粒,純化後轉化SY204菌株,藍白斑篩選挑取白色突變斑,計算突變頻率併進行DNA測序檢測突變頻譜.結果 經酶切鑒定和測序分析,插入片段長度和序列正確.在Dox誘導下取得瞭SupF報告基因在轉錄偶聯脩複途徑中的突變頻率與頻譜.結論 重組的pTCR-2質粒具有在真覈細胞中Tet啟動的轉錄活性,應用于順鉑緻突變研究中,使轉錄條件下的突變情況能夠得以反映.
목적 연구TCR재순박도치적세포내DNA손상화돌변과정중적분자궤제,병위진일보연구전록우련수복여돌변발생적분자궤제제공중요분자생물학의거.방법 수선장SupF돌변보고기인극륭도대유쌍향진핵계동자적함유Tet조공원건TRE적표체재체pBI-L적다극륭위점(MCS)상,획득pTCR-1,재장SV40ori원건삽입pTCR-1재체,최종획득pTCR-2질립.매절화DNA측서증실후,용순박장pTCR-2진행체외DNA손상후순시전염지Tet-on 293세포,재Dox유도하배양48 h,종세포내제취질립,순화후전화SY204균주,람백반사선도취백색돌변반,계산돌변빈솔병진행DNA측서검측돌변빈보.결과 경매절감정화측서분석,삽입편단장도화서렬정학.재Dox유도하취득료SupF보고기인재전록우련수복도경중적돌변빈솔여빈보.결론 중조적pTCR-2질립구유재진핵세포중Tet계동적전록활성,응용우순박치돌변연구중,사전록조건하적돌변정황능구득이반영.
