畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2009年
9期
1420-1425
,共6页
范运峰%赵启祖%赵耘%邹兴启%徐璐%张仲秋%王琴%宁宜宝
範運峰%趙啟祖%趙耘%鄒興啟%徐璐%張仲鞦%王琴%寧宜寶
범운봉%조계조%조운%추흥계%서로%장중추%왕금%저의보
猪瘟病毒%疫苗Thiverval株%感染性克隆%病毒拯救
豬瘟病毒%疫苗Thiverval株%感染性剋隆%病毒拯救
저온병독%역묘Thiverval주%감염성극륭%병독증구
采用高保真DNA聚合酶,分7个片段扩增猪瘟病毒(CSFV)Thiverval株全基因组序列,克隆至pMD18-T载体并测序.经适当的连接策略将各片段连接克隆至低拷贝载体质粒pAC/F101,同时对病毒基因组5'和3'末端进行修饰,构建出含有T7启动子、榔头状(HH)核酶基因、CSFV Thiverval全基因组、丁型肝炎病毒(HDV)核酶基因和T7终止子的重组质粒pAC/F101/T1-7.利用T7 RNA聚合酶将线性化重组质粒pAC/F101/T1-7体外转录成基因组RNA,再使用脂质体转染将体外转录RNA转染PK-15细胞.通过传代、RT-PCR、免疫过氧化物酶细胞单层试验鉴定,表明成功的从感染性克隆拯救出活病毒粒子.猪瘟病毒低温诱变疫苗"Thiverval"株感染性克隆的构建及病毒的成功拯救,为进一步研究CSFV疫苗株的致弱机制提供了重要工具.
採用高保真DNA聚閤酶,分7箇片段擴增豬瘟病毒(CSFV)Thiverval株全基因組序列,剋隆至pMD18-T載體併測序.經適噹的連接策略將各片段連接剋隆至低拷貝載體質粒pAC/F101,同時對病毒基因組5'和3'末耑進行脩飾,構建齣含有T7啟動子、榔頭狀(HH)覈酶基因、CSFV Thiverval全基因組、丁型肝炎病毒(HDV)覈酶基因和T7終止子的重組質粒pAC/F101/T1-7.利用T7 RNA聚閤酶將線性化重組質粒pAC/F101/T1-7體外轉錄成基因組RNA,再使用脂質體轉染將體外轉錄RNA轉染PK-15細胞.通過傳代、RT-PCR、免疫過氧化物酶細胞單層試驗鑒定,錶明成功的從感染性剋隆拯救齣活病毒粒子.豬瘟病毒低溫誘變疫苗"Thiverval"株感染性剋隆的構建及病毒的成功拯救,為進一步研究CSFV疫苗株的緻弱機製提供瞭重要工具.
채용고보진DNA취합매,분7개편단확증저온병독(CSFV)Thiverval주전기인조서렬,극륭지pMD18-T재체병측서.경괄당적련접책략장각편단련접극륭지저고패재체질립pAC/F101,동시대병독기인조5'화3'말단진행수식,구건출함유T7계동자、랑두상(HH)핵매기인、CSFV Thiverval전기인조、정형간염병독(HDV)핵매기인화T7종지자적중조질립pAC/F101/T1-7.이용T7 RNA취합매장선성화중조질립pAC/F101/T1-7체외전록성기인조RNA,재사용지질체전염장체외전록RNA전염PK-15세포.통과전대、RT-PCR、면역과양화물매세포단층시험감정,표명성공적종감염성극륭증구출활병독입자.저온병독저온유변역묘"Thiverval"주감염성극륭적구건급병독적성공증구,위진일보연구CSFV역묘주적치약궤제제공료중요공구.
