CAJ | 학술논문

目的:筛选并克隆人胃癌细胞eDNA文库中与三叶因子2(trefoil factor family 2,TFF2)蛋白相互作用的蛋白基因.方法:RT-PCR方法验证胃癌细胞存在TFF2mRNA表达:PCR法扩增TFF2基因,Not I与Sal I双酶切后定向克隆到酵母表达载体pDEST32,构建TFF2的诱饵质粒;Western blot验证TFF2诱饵质粒在酵母细胞中相应融合蛋白的表达:将诱饵质粒和人胃癌-cDNA文库猎物质粒共同转化MaV203酵母感受态细胞,通过营养缺陷型培养基(ura、His)与x-gal进行3重筛选阳性克隆,提取阳性克隆质粒测序,应用蛋白质数据库及生物信息学技术,对测序结果进行分析.结果:RT-PCR法证实胃癌细胞中存在TFF2mRNA表达;构建pDEST32-TFF2诱饵表达质粒成功:Western blot法证实诱饵质粒转化酵母细胞后正确表达TFF2-GAL4DBD融合蛋白:通过酵母双杂交筛选胃癌细胞cDNA文库,共获得35个表达His、Ura及x-gal报告基因的阳性克隆,其中测序成功为16个克隆,包含12个已知蛋白基因与4个未知功能基因.结论:从胃癌细胞cDNA文库中筛选出多种TFF2相互作用蛋白基因,其可能与胃癌的发生发展密切相关.
목적:사선병극륭인위암세포eDNA문고중여삼협인자2(trefoil factor family 2,TFF2)단백상호작용적단백기인.방법:RT-PCR방법험증위암세포존재TFF2mRNA표체:PCR법확증TFF2기인,Not I여Sal I쌍매절후정향극륭도효모표체재체pDEST32,구건TFF2적유이질립;Western blot험증TFF2유이질립재효모세포중상응융합단백적표체:장유이질립화인위암-cDNA문고작물질립공동전화MaV203효모감수태세포,통과영양결함형배양기(ura、His)여x-gal진행3중사선양성극륭,제취양성극륭질립측서,응용단백질수거고급생물신식학기술,대측서결과진행분석.결과:RT-PCR법증실위암세포중존재TFF2mRNA표체;구건pDEST32-TFF2유이표체질립성공:Western blot법증실유이질립전화효모세포후정학표체TFF2-GAL4DBD융합단백:통과효모쌍잡교사선위암세포cDNA문고,공획득35개표체His、Ura급x-gal보고기인적양성극륭,기중측서성공위16개극륭,포함12개이지단백기인여4개미지공능기인.결론:종위암세포cDNA문고중사선출다충TFF2상호작용단백기인,기가능여위암적발생발전밀절상관.