中华损伤与修复杂志(电子版)
中華損傷與脩複雜誌(電子版)
중화손상여수복잡지(전자판)
CHINESE JOURNAL OF INJURY REPAIR AND WOUND HEALING
2010年
2期
161-169
,共9页
孙天骏%韩焱福%柴家科%李东杰%陶然%邓虎平%董宁%刘玲英
孫天駿%韓焱福%柴傢科%李東傑%陶然%鄧虎平%董寧%劉玲英
손천준%한염복%시가과%리동걸%도연%산호평%동저%류령영
血管内皮生长因子类%间质干细胞%脐带%重组腺病毒%转染
血管內皮生長因子類%間質榦細胞%臍帶%重組腺病毒%轉染
혈관내피생장인자류%간질간세포%제대%중조선병독%전염
目的 探讨腺病毒介导血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转染人脐带间充质干细胞(UCMSCs)后目的基因表达情况及对UCMSCs生长增生的影响.方法 UCMSCs传代培养后,以腺病毒介导绿色荧光蛋白(GFP)基因进行体外转染,倒置荧光显微镜下观察细胞转染效果,流式细胞仪检测细胞转染效率,确定最佳的病毒感染复数(MOI).将实验分为VEGF基因转染组和未转染组.转染组在最佳MOI值条件下以腺病毒介导VEGF基因体外转染UCMSCs;未转染组以PBS代替病毒液.通过免疫荧光染色及Western blotting检测两组UCMSCs VEGF蛋白的表达情况,RT-PCR检测VEGF基因mRNA的表达情况,ELISA检测培养液中VEGF浓度,MTT法评价转染后对UCMSCs生长增生的影响.结果 腺病毒介导的GFP基因对于UCMSCs具有较高的转染效率,转染效率与MOI值具有量效关系,当MOI为100倍时,转染效率达95%.转染VEGF基因后2 d,UCMSCs在mRNA和蛋白水平上均可有效表达VEGF,免疫荧光染色、RT-PCR、Western blotting显示转染组明显表达VEGF,ELISA检测结果显示7 d时达到表达高峰,13 d后仍可检测到VEGF的表达.介导VEGF基因转染的腺病毒对UCMSCs的生长增生没有明显影响.结论 UCMSCs是一种较理想的基因载体细胞,腺病毒介导VEGF基因可以有效转染UCMSCs,转染后VEGF基因可获得较高的表达水平.
目的 探討腺病毒介導血管內皮細胞生長因子(VEGF)基因轉染人臍帶間充質榦細胞(UCMSCs)後目的基因錶達情況及對UCMSCs生長增生的影響.方法 UCMSCs傳代培養後,以腺病毒介導綠色熒光蛋白(GFP)基因進行體外轉染,倒置熒光顯微鏡下觀察細胞轉染效果,流式細胞儀檢測細胞轉染效率,確定最佳的病毒感染複數(MOI).將實驗分為VEGF基因轉染組和未轉染組.轉染組在最佳MOI值條件下以腺病毒介導VEGF基因體外轉染UCMSCs;未轉染組以PBS代替病毒液.通過免疫熒光染色及Western blotting檢測兩組UCMSCs VEGF蛋白的錶達情況,RT-PCR檢測VEGF基因mRNA的錶達情況,ELISA檢測培養液中VEGF濃度,MTT法評價轉染後對UCMSCs生長增生的影響.結果 腺病毒介導的GFP基因對于UCMSCs具有較高的轉染效率,轉染效率與MOI值具有量效關繫,噹MOI為100倍時,轉染效率達95%.轉染VEGF基因後2 d,UCMSCs在mRNA和蛋白水平上均可有效錶達VEGF,免疫熒光染色、RT-PCR、Western blotting顯示轉染組明顯錶達VEGF,ELISA檢測結果顯示7 d時達到錶達高峰,13 d後仍可檢測到VEGF的錶達.介導VEGF基因轉染的腺病毒對UCMSCs的生長增生沒有明顯影響.結論 UCMSCs是一種較理想的基因載體細胞,腺病毒介導VEGF基因可以有效轉染UCMSCs,轉染後VEGF基因可穫得較高的錶達水平.
목적 탐토선병독개도혈관내피세포생장인자(VEGF)기인전염인제대간충질간세포(UCMSCs)후목적기인표체정황급대UCMSCs생장증생적영향.방법 UCMSCs전대배양후,이선병독개도록색형광단백(GFP)기인진행체외전염,도치형광현미경하관찰세포전염효과,류식세포의검측세포전염효솔,학정최가적병독감염복수(MOI).장실험분위VEGF기인전염조화미전염조.전염조재최가MOI치조건하이선병독개도VEGF기인체외전염UCMSCs;미전염조이PBS대체병독액.통과면역형광염색급Western blotting검측량조UCMSCs VEGF단백적표체정황,RT-PCR검측VEGF기인mRNA적표체정황,ELISA검측배양액중VEGF농도,MTT법평개전염후대UCMSCs생장증생적영향.결과 선병독개도적GFP기인대우UCMSCs구유교고적전염효솔,전염효솔여MOI치구유량효관계,당MOI위100배시,전염효솔체95%.전염VEGF기인후2 d,UCMSCs재mRNA화단백수평상균가유효표체VEGF,면역형광염색、RT-PCR、Western blotting현시전염조명현표체VEGF,ELISA검측결과현시7 d시체도표체고봉,13 d후잉가검측도VEGF적표체.개도VEGF기인전염적선병독대UCMSCs적생장증생몰유명현영향.결론 UCMSCs시일충교이상적기인재체세포,선병독개도VEGF기인가이유효전염UCMSCs,전염후VEGF기인가획득교고적표체수평.
