中国畜牧杂志
中國畜牧雜誌
중국축목잡지
CHINESE JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE
2010年
23期
15-20
,共6页
杨海燕%孙敏%田智泉%任丽伟%秦玉蓉%许峰%李碧春
楊海燕%孫敏%田智泉%任麗偉%秦玉蓉%許峰%李碧春
양해연%손민%전지천%임려위%진옥용%허봉%리벽춘
胚胎干(ES)细胞%电穿孔%pEGFP-N1%鸡
胚胎榦(ES)細胞%電穿孔%pEGFP-N1%鷄
배태간(ES)세포%전천공%pEGFP-N1%계
以EGFP为报告基因体外电穿孔转染鸡X期胚盘细胞,探讨适宜电转染条件以及影响鸡ES细胞存活率和转染率因素.分离鸡X期胚盘细胞进行培养、传代及鉴定,二代细胞设定不同的电压、脉冲时间、质粒浓度、细胞密度及孵育温度等条件转染.电击后10 min,0.4%台盼蓝染色,血细胞计数板计数,计算存活率.48 h后在荧光显微镜下计绿色荧光细胞数和总细胞数,计算转染率.结果表明:电转染鸡ES细胞的最优化电压为280 v,脉冲时间为75μs,质粒浓度为20μg/mL,转染前4℃、转染后25℃(室温)或4℃各静置10 min,细胞密度调整在1×105个/mL×106个/mL,尽量使细胞处于对数生长期.电穿孔法转染鸡ES细胞是简便有效的方法,利用优化条件转染ES细胞,可以满足进一步实验的要求.
以EGFP為報告基因體外電穿孔轉染鷄X期胚盤細胞,探討適宜電轉染條件以及影響鷄ES細胞存活率和轉染率因素.分離鷄X期胚盤細胞進行培養、傳代及鑒定,二代細胞設定不同的電壓、脈遲時間、質粒濃度、細胞密度及孵育溫度等條件轉染.電擊後10 min,0.4%檯盼藍染色,血細胞計數闆計數,計算存活率.48 h後在熒光顯微鏡下計綠色熒光細胞數和總細胞數,計算轉染率.結果錶明:電轉染鷄ES細胞的最優化電壓為280 v,脈遲時間為75μs,質粒濃度為20μg/mL,轉染前4℃、轉染後25℃(室溫)或4℃各靜置10 min,細胞密度調整在1×105箇/mL×106箇/mL,儘量使細胞處于對數生長期.電穿孔法轉染鷄ES細胞是簡便有效的方法,利用優化條件轉染ES細胞,可以滿足進一步實驗的要求.
이EGFP위보고기인체외전천공전염계X기배반세포,탐토괄의전전염조건이급영향계ES세포존활솔화전염솔인소.분리계X기배반세포진행배양、전대급감정,이대세포설정불동적전압、맥충시간、질립농도、세포밀도급부육온도등조건전염.전격후10 min,0.4%태반람염색,혈세포계수판계수,계산존활솔.48 h후재형광현미경하계록색형광세포수화총세포수,계산전염솔.결과표명:전전염계ES세포적최우화전압위280 v,맥충시간위75μs,질립농도위20μg/mL,전염전4℃、전염후25℃(실온)혹4℃각정치10 min,세포밀도조정재1×105개/mL×106개/mL,진량사세포처우대수생장기.전천공법전염계ES세포시간편유효적방법,이용우화조건전염ES세포,가이만족진일보실험적요구.
