南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2012年
4期
467-471
,共5页
李锦%白雪源%崔少远%傅博%陈香美
李錦%白雪源%崔少遠%傅博%陳香美
리금%백설원%최소원%부박%진향미
系膜细胞%高糖%雷帕霉素%自噬%氧化损伤%衰老
繫膜細胞%高糖%雷帕黴素%自噬%氧化損傷%衰老
계막세포%고당%뢰파매소%자서%양화손상%쇠로
目的 探讨雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤(3-MA)对高糖诱导的原代大鼠系膜细胞自噬、氧化损伤及衰老的影响.方法 从大鼠肾分离培养原代肾小球系膜细胞(GMCs),分为正常对照组、高糖组、高糖+雷帕霉素(自噬增强剂)及高糖+3-甲基腺嘌呤(自噬抑制剂)干预组.在细胞培养24h、72h及10d时,Western blotting观测自噬标志物-自噬相关基因LC3及泛素结合蛋白p62/SQSTM1的表达变化;硫代巴比妥酸法检测细胞脂质损伤产物-丙二醛(MDA)水平,2,4-二硝基苯肼(DNPH)比色法测定细胞蛋白质损伤产物-羰基含量,通过进行衰老相关β-半乳糖苷酶活性( SA-β-gal)染色及衰老相关异染色质斑块(SAHF)分析检测细胞的衰老程度.结果 与对照组相比,细胞经高糖处理72h和10d后,自噬标志物LC3表达降低,p62/SQSTMI升高,MDA及羰基含量上升(均P＜0.05)；处理72h细胞SA-β-gal染色阳性率增加(P＜0.05),细胞核异染色质斑块形成增加.高糖培养的细胞用雷帕霉素干预72h和10d后,LC3表达升高,p62/SQSTMI表达下降,MDA及蛋白质羰基含量均下降(均P＜0.05),72h后细胞SA-β-gal染色阳性率下降(P＜0.05),细胞核异染色质斑块形成减少；高糖培养的细胞用3-MA干预72 h和l0d后,LC3表达下降,p62/SQSTMI表达升高,MDA及蛋白质羰基含量升高(均P＜0.05).72h细胞SA-β-gal染色阳性率上升(P＜0.05),细胞核斑块形成增多.结论 高糖可抑制系膜细胞自噬功能,促进系膜细胞氧化损伤,加速细胞衰老；雷帕霉素干预可减轻高糖对系膜细胞自噬功能抑制,减少氧化损伤,延缓衰老；3-MA加重高糖对系膜细胞自噬功能的抑制,进一步加重细胞氧化损伤,加速衰老.
目的 探討雷帕黴素及3-甲基腺嘌呤(3-MA)對高糖誘導的原代大鼠繫膜細胞自噬、氧化損傷及衰老的影響.方法 從大鼠腎分離培養原代腎小毬繫膜細胞(GMCs),分為正常對照組、高糖組、高糖+雷帕黴素(自噬增彊劑)及高糖+3-甲基腺嘌呤(自噬抑製劑)榦預組.在細胞培養24h、72h及10d時,Western blotting觀測自噬標誌物-自噬相關基因LC3及汎素結閤蛋白p62/SQSTM1的錶達變化;硫代巴比妥痠法檢測細胞脂質損傷產物-丙二醛(MDA)水平,2,4-二硝基苯肼(DNPH)比色法測定細胞蛋白質損傷產物-羰基含量,通過進行衰老相關β-半乳糖苷酶活性( SA-β-gal)染色及衰老相關異染色質斑塊(SAHF)分析檢測細胞的衰老程度.結果 與對照組相比,細胞經高糖處理72h和10d後,自噬標誌物LC3錶達降低,p62/SQSTMI升高,MDA及羰基含量上升(均P＜0.05)；處理72h細胞SA-β-gal染色暘性率增加(P＜0.05),細胞覈異染色質斑塊形成增加.高糖培養的細胞用雷帕黴素榦預72h和10d後,LC3錶達升高,p62/SQSTMI錶達下降,MDA及蛋白質羰基含量均下降(均P＜0.05),72h後細胞SA-β-gal染色暘性率下降(P＜0.05),細胞覈異染色質斑塊形成減少；高糖培養的細胞用3-MA榦預72 h和l0d後,LC3錶達下降,p62/SQSTMI錶達升高,MDA及蛋白質羰基含量升高(均P＜0.05).72h細胞SA-β-gal染色暘性率上升(P＜0.05),細胞覈斑塊形成增多.結論 高糖可抑製繫膜細胞自噬功能,促進繫膜細胞氧化損傷,加速細胞衰老；雷帕黴素榦預可減輕高糖對繫膜細胞自噬功能抑製,減少氧化損傷,延緩衰老；3-MA加重高糖對繫膜細胞自噬功能的抑製,進一步加重細胞氧化損傷,加速衰老.
목적 탐토뢰파매소급3-갑기선표령(3-MA)대고당유도적원대대서계막세포자서、양화손상급쇠로적영향.방법 종대서신분리배양원대신소구계막세포(GMCs),분위정상대조조、고당조、고당+뢰파매소(자서증강제)급고당+3-갑기선표령(자서억제제)간예조.재세포배양24h、72h급10d시,Western blotting관측자서표지물-자서상관기인LC3급범소결합단백p62/SQSTM1적표체변화;류대파비타산법검측세포지질손상산물-병이철(MDA)수평,2,4-이초기분정(DNPH)비색법측정세포단백질손상산물-탄기함량,통과진행쇠로상관β-반유당감매활성( SA-β-gal)염색급쇠로상관이염색질반괴(SAHF)분석검측세포적쇠로정도.결과 여대조조상비,세포경고당처리72h화10d후,자서표지물LC3표체강저,p62/SQSTMI승고,MDA급탄기함량상승(균P＜0.05)；처리72h세포SA-β-gal염색양성솔증가(P＜0.05),세포핵이염색질반괴형성증가.고당배양적세포용뢰파매소간예72h화10d후,LC3표체승고,p62/SQSTMI표체하강,MDA급단백질탄기함량균하강(균P＜0.05),72h후세포SA-β-gal염색양성솔하강(P＜0.05),세포핵이염색질반괴형성감소；고당배양적세포용3-MA간예72 h화l0d후,LC3표체하강,p62/SQSTMI표체승고,MDA급단백질탄기함량승고(균P＜0.05).72h세포SA-β-gal염색양성솔상승(P＜0.05),세포핵반괴형성증다.결론 고당가억제계막세포자서공능,촉진계막세포양화손상,가속세포쇠로；뢰파매소간예가감경고당대계막세포자서공능억제,감소양화손상,연완쇠로；3-MA가중고당대계막세포자서공능적억제,진일보가중세포양화손상,가속쇠로.
