CAJ | 학술논문

目的:应用流式细胞仪(FCM)结合侧向角散射光(ssC)和细胞自发荧光强度分选大鼠胰岛β细胞.方法:选取正常雄性SD大鼠,胶原酶消化显微镜下手捡纯化胰岛.胰岛以胰蛋白酶和DNA酶消化成单细胞悬液.依据细胞自发荧光强度和SSC的差异通过流式细胞仪进行细胞分选.细胞存活率用PI/HO双染法鉴定,β细胞的纯度用细胞免疫组化鉴定.胰岛素测定采用酶联免疫吸附法.结果:自发荧光强度和SSC均高的细胞群中胰岛素染色阳性的细胞百分比为(94.5±0.95)％,较分选前单细胞中胰岛素染色阳性细胞百分比(81.2±1.12)％增高,为β细胞富集群；自发荧光强度和SSC均较低的细胞群中胰岛素染色阳性的细胞百分比为(10.0±0.82)％,为non-β细胞群.分选出的β细胞群死亡率低(＜5％),其胰岛素分泌随葡萄糖刺激浓度的增加而增加(r=0.8,P＜0.001),其中葡萄糖浓度在20 mmol/L时β细胞分泌的胰岛素明显大于浓度为2.8 mmol/L时的分泌量(P＜0.001).此外,Forskolin (FK)和Exendin-4 (EX4)可以显著增强β细胞胰岛素的分泌(PFK＜0.001,PEX4＜0.05).结论:根据β细胞自发荧光和SSC与non -β细胞的差异进行纯化的β细胞死亡率低、纯度高,胰岛素分泌功能较好,是一种值得推广的分选β细胞的方法.
목적:응용류식세포의(FCM)결합측향각산사광(ssC)화세포자발형광강도분선대서이도β세포.방법:선취정상웅성SD대서,효원매소화현미경하수검순화이도.이도이이단백매화DNA매소화성단세포현액.의거세포자발형광강도화SSC적차이통과류식세포의진행세포분선.세포존활솔용PI/HO쌍염법감정,β세포적순도용세포면역조화감정.이도소측정채용매련면역흡부법.결과:자발형광강도화SSC균고적세포군중이도소염색양성적세포백분비위(94.5±0.95)％,교분선전단세포중이도소염색양성세포백분비(81.2±1.12)％증고,위β세포부집군；자발형광강도화SSC균교저적세포군중이도소염색양성적세포백분비위(10.0±0.82)％,위non-β세포군.분선출적β세포군사망솔저(＜5％),기이도소분비수포도당자격농도적증가이증가(r=0.8,P＜0.001),기중포도당농도재20 mmol/L시β세포분비적이도소명현대우농도위2.8 mmol/L시적분비량(P＜0.001).차외,Forskolin (FK)화Exendin-4 (EX4)가이현저증강β세포이도소적분비(PFK＜0.001,PEX4＜0.05).결론:근거β세포자발형광화SSC여non -β세포적차이진행순화적β세포사망솔저、순도고,이도소분비공능교호,시일충치득추엄적분선β세포적방법.