中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2007年
11期
1131-1134
,共4页
尹晓琳%石新丽%魏林%王秀荣%马翠卿%冯惠东
尹曉琳%石新麗%魏林%王秀榮%馬翠卿%馮惠東
윤효림%석신려%위림%왕수영%마취경%풍혜동
尿路致病性大肠杆菌%Ⅰ型菌毛%fimH和fimC基因%原核表达
尿路緻病性大腸桿菌%Ⅰ型菌毛%fimH和fimC基因%原覈錶達
뇨로치병성대장간균%Ⅰ형균모%fimH화fimC기인%원핵표체
目的 构建以尿路致病性大肠杆菌(UPEC)Ⅰ型菌毛编码基因fimH 和fimC为目的基因的原核重组表达质粒,诱导其在E.coli BL-21中表达,并对其免疫原性进行分析.方法 PCR法自UPEC标准菌株J96获取 fimH和fimC 基因,分别插入原核表达载体pGEX-4T-2;将重组表达质粒转染感受态E.coli BL-21,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE 和Western blot鉴定并纯化目的蛋白fimH和fimC蛋白,定量后免疫BALB/c小鼠,动态检测抗体产生水平.结果 PCR法克隆出全长为903bp的fimH和720bp的fimC基因,构建的原核表达质粒pGEX-4T-2-fimH及pGEX-4T-2-fimC经诱导可分别表达出60KD和48KD左右的GST融合蛋白;蛋白经纯化后免疫动物能诱导产生高效价的IgG抗体.结论 成功获取了UPECⅠ型菌毛基因fimH和fimC,所构建的原核表达质粒在BL-21中成功表达;fimH有免疫原性.
目的 構建以尿路緻病性大腸桿菌(UPEC)Ⅰ型菌毛編碼基因fimH 和fimC為目的基因的原覈重組錶達質粒,誘導其在E.coli BL-21中錶達,併對其免疫原性進行分析.方法 PCR法自UPEC標準菌株J96穫取 fimH和fimC 基因,分彆插入原覈錶達載體pGEX-4T-2;將重組錶達質粒轉染感受態E.coli BL-21,經IPTG誘導錶達、SDS-PAGE 和Western blot鑒定併純化目的蛋白fimH和fimC蛋白,定量後免疫BALB/c小鼠,動態檢測抗體產生水平.結果 PCR法剋隆齣全長為903bp的fimH和720bp的fimC基因,構建的原覈錶達質粒pGEX-4T-2-fimH及pGEX-4T-2-fimC經誘導可分彆錶達齣60KD和48KD左右的GST融閤蛋白;蛋白經純化後免疫動物能誘導產生高效價的IgG抗體.結論 成功穫取瞭UPECⅠ型菌毛基因fimH和fimC,所構建的原覈錶達質粒在BL-21中成功錶達;fimH有免疫原性.
목적 구건이뇨로치병성대장간균(UPEC)Ⅰ형균모편마기인fimH 화fimC위목적기인적원핵중조표체질립,유도기재E.coli BL-21중표체,병대기면역원성진행분석.방법 PCR법자UPEC표준균주J96획취 fimH화fimC 기인,분별삽입원핵표체재체pGEX-4T-2;장중조표체질립전염감수태E.coli BL-21,경IPTG유도표체、SDS-PAGE 화Western blot감정병순화목적단백fimH화fimC단백,정량후면역BALB/c소서,동태검측항체산생수평.결과 PCR법극륭출전장위903bp적fimH화720bp적fimC기인,구건적원핵표체질립pGEX-4T-2-fimH급pGEX-4T-2-fimC경유도가분별표체출60KD화48KD좌우적GST융합단백;단백경순화후면역동물능유도산생고효개적IgG항체.결론 성공획취료UPECⅠ형균모기인fimH화fimC,소구건적원핵표체질립재BL-21중성공표체;fimH유면역원성.
