现代中西医结合杂志
現代中西醫結閤雜誌
현대중서의결합잡지
MODERN JOURNAL OF INTEGRATED TRADITIONAL CHINESE AND WESTERN MEDICINE
2008年
21期
3250-3252
,共3页
俞莉敏%杨昀焯%吴镇权%李继云
俞莉敏%楊昀焯%吳鎮權%李繼雲
유리민%양윤작%오진권%리계운
人骨形态发生蛋白%基因克隆%基因表达%大肠杆菌
人骨形態髮生蛋白%基因剋隆%基因錶達%大腸桿菌
인골형태발생단백%기인극륭%기인표체%대장간균
目的 探讨克隆人骨形态发生蛋白2(hBMP2)成熟肽的最精简的基因序列并原核表达方法.方法 剔除所有信号肽和中间前肽的非必需基因序列,以RT-PCR方法克隆扩增出hBMP2的342bp的成熟肽基因片段,将其与原核表达载体PBV220酶切后相连接并测序,构建PBV220-hBMP2的真核基因原核表达系统,在DH5α大肠杆菌下扩增并温度诱导表达hBMP2蛋白质,SDS-PAGE检测表达蛋白.结果 RT-PCR扩增出hBMP2的成熟肽基因342bp片段与Genbank公布的序列完全一致,且经DNA电泳和蛋白电泳鉴定,构建PBV220-hBMP2原核表达系统可导入DH5α大肠杆菌,并在温度诱导下表达出约16kD的蛋白条带,诱导培养4h后的蛋白表达量达到最高峰.结论 成功扩增342bp的成熟肽hBMP2基因片段能在原核大肠杆菌上有效表达生产hBMP2蛋白质.
目的 探討剋隆人骨形態髮生蛋白2(hBMP2)成熟肽的最精簡的基因序列併原覈錶達方法.方法 剔除所有信號肽和中間前肽的非必需基因序列,以RT-PCR方法剋隆擴增齣hBMP2的342bp的成熟肽基因片段,將其與原覈錶達載體PBV220酶切後相連接併測序,構建PBV220-hBMP2的真覈基因原覈錶達繫統,在DH5α大腸桿菌下擴增併溫度誘導錶達hBMP2蛋白質,SDS-PAGE檢測錶達蛋白.結果 RT-PCR擴增齣hBMP2的成熟肽基因342bp片段與Genbank公佈的序列完全一緻,且經DNA電泳和蛋白電泳鑒定,構建PBV220-hBMP2原覈錶達繫統可導入DH5α大腸桿菌,併在溫度誘導下錶達齣約16kD的蛋白條帶,誘導培養4h後的蛋白錶達量達到最高峰.結論 成功擴增342bp的成熟肽hBMP2基因片段能在原覈大腸桿菌上有效錶達生產hBMP2蛋白質.
목적 탐토극륭인골형태발생단백2(hBMP2)성숙태적최정간적기인서렬병원핵표체방법.방법 척제소유신호태화중간전태적비필수기인서렬,이RT-PCR방법극륭확증출hBMP2적342bp적성숙태기인편단,장기여원핵표체재체PBV220매절후상련접병측서,구건PBV220-hBMP2적진핵기인원핵표체계통,재DH5α대장간균하확증병온도유도표체hBMP2단백질,SDS-PAGE검측표체단백.결과 RT-PCR확증출hBMP2적성숙태기인342bp편단여Genbank공포적서렬완전일치,차경DNA전영화단백전영감정,구건PBV220-hBMP2원핵표체계통가도입DH5α대장간균,병재온도유도하표체출약16kD적단백조대,유도배양4h후적단백표체량체도최고봉.결론 성공확증342bp적성숙태hBMP2기인편단능재원핵대장간균상유효표체생산hBMP2단백질.