CAJ | 학술논문

背景:近年研究证实嗅鞘细胞具有支持和促进多种神经元存活和轴突再生的作用,与其分泌的神经营养活性物质相关,如神经生长因子、脑源性神经营养因子等.神经营养活性物质在维持神经元存活、生长以及损伤后修复与再生方面的作用值得关注.目的:探讨神经生长因子是否在嗅鞘细胞条件培养液的神经保护中发挥重要作用.设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2006-0112007-03在解放军南京军区南京总医院神经内科实验室完成.材料:成年SD大鼠30只用于嗅鞘细胞培养,出生24 h内的SD乳鼠60只用于脑海马神经元培养.方法:采用差速贴壁法纯化大鼠嗅鞘细胞,添加Forskolin和碱性成纤维细胞生长因子促进细胞增殖,培养至10 d,取生长状态良好的细胞,按1 × 109L-1密度接种,待细胞贴壁后加入含B27的Neurobasal培养基,48 h后收集上清液.待所有嗅鞘细胞条件培养液收集完毕后,将其混合,低温离心后收集浓缩的嗅鞘细胞条件培养液,-80℃保存备用.取体外分离培养的乳鼠脑海马神经元,设立正常组、谷氨酸损伤模型组、嗅鞘细胞条件培养液组、抗神经生长因子抗体+嗅鞘细胞条件培养液组.主要观察指标:海马神经元活性,上清液中乳酸脱氢酶浓度,神经元凋亡率.结果:与正常组比较,其余3组神经元活性均明显下降(P<0.05或0.01);与谷氨酸损伤模型组比较,嗅鞘细胞条件培养液组、抗神经生长因子抗体+嗅鞘细胞条件培养液组神经元活性均明显增高(P<0.01或0.05),且前者升高幅度大于后者(F=5.85,P<0.05).与正常组比较.其余3组乳酸脱氢酶浓度及神经元凋亡率均明最增高(P<0.05或0.01);与谷氨酸损伤模型组比较,嗅鞘细胞条件培养液组、抗神经生长因子抗体+嗅鞘细胞条件培养液组乳酸脱氢酶浓度及神经元凋亡率均明显下降(P<0.01或0.05),且前者下降幅度大于后者(F=5.04,F=5.16,P<0.05).结论:嗅鞘细胞条件培养液可提高损伤海马神经元活性,抑制上清液中乳酸脱氢酶释放和神经元凋亡;消除神经生长因子后,以上保护作用减弱,提示嗅鞘细胞条件培养液中存在多种营养物质共同发挥神经保护作用,尤以神经生长因子为重. 揹景:近年研究證實嗅鞘細胞具有支持和促進多種神經元存活和軸突再生的作用,與其分泌的神經營養活性物質相關,如神經生長因子、腦源性神經營養因子等.神經營養活性物質在維持神經元存活、生長以及損傷後脩複與再生方麵的作用值得關註.目的:探討神經生長因子是否在嗅鞘細胞條件培養液的神經保護中髮揮重要作用.設計、時間及地點:細胞學體外對照觀察,于2006-0112007-03在解放軍南京軍區南京總醫院神經內科實驗室完成.材料:成年SD大鼠30隻用于嗅鞘細胞培養,齣生24 h內的SD乳鼠60隻用于腦海馬神經元培養.方法:採用差速貼壁法純化大鼠嗅鞘細胞,添加Forskolin和堿性成纖維細胞生長因子促進細胞增殖,培養至10 d,取生長狀態良好的細胞,按1 × 109L-1密度接種,待細胞貼壁後加入含B27的Neurobasal培養基,48 h後收集上清液.待所有嗅鞘細胞條件培養液收集完畢後,將其混閤,低溫離心後收集濃縮的嗅鞘細胞條件培養液,-80℃保存備用.取體外分離培養的乳鼠腦海馬神經元,設立正常組、穀氨痠損傷模型組、嗅鞘細胞條件培養液組、抗神經生長因子抗體+嗅鞘細胞條件培養液組.主要觀察指標:海馬神經元活性,上清液中乳痠脫氫酶濃度,神經元凋亡率.結果:與正常組比較,其餘3組神經元活性均明顯下降(P<0.05或0.01);與穀氨痠損傷模型組比較,嗅鞘細胞條件培養液組、抗神經生長因子抗體+嗅鞘細胞條件培養液組神經元活性均明顯增高(P<0.01或0.05),且前者升高幅度大于後者(F=5.85,P<0.05).與正常組比較.其餘3組乳痠脫氫酶濃度及神經元凋亡率均明最增高(P<0.05或0.01);與穀氨痠損傷模型組比較,嗅鞘細胞條件培養液組、抗神經生長因子抗體+嗅鞘細胞條件培養液組乳痠脫氫酶濃度及神經元凋亡率均明顯下降(P<0.01或0.05),且前者下降幅度大于後者(F=5.04,F=5.16,P<0.05).結論:嗅鞘細胞條件培養液可提高損傷海馬神經元活性,抑製上清液中乳痠脫氫酶釋放和神經元凋亡;消除神經生長因子後,以上保護作用減弱,提示嗅鞘細胞條件培養液中存在多種營養物質共同髮揮神經保護作用,尤以神經生長因子為重.
배경:근년연구증실후초세포구유지지화촉진다충신경원존활화축돌재생적작용,여기분비적신경영양활성물질상관,여신경생장인자、뇌원성신경영양인자등.신경영양활성물질재유지신경원존활、생장이급손상후수복여재생방면적작용치득관주.목적:탐토신경생장인자시부재후초세포조건배양액적신경보호중발휘중요작용.설계、시간급지점:세포학체외대조관찰,우2006-0112007-03재해방군남경군구남경총의원신경내과실험실완성.재료:성년SD대서30지용우후초세포배양,출생24 h내적SD유서60지용우뇌해마신경원배양.방법:채용차속첩벽법순화대서후초세포,첨가Forskolin화감성성섬유세포생장인자촉진세포증식,배양지10 d,취생장상태량호적세포,안1 × 109L-1밀도접충,대세포첩벽후가입함B27적Neurobasal배양기,48 h후수집상청액.대소유후초세포조건배양액수집완필후,장기혼합,저온리심후수집농축적후초세포조건배양액,-80℃보존비용.취체외분리 배양적유서뇌해마신경원,설립정상조、곡안산손상모형조、후초세포조건배양액조、항신경생장인자항체+후초세포조건배양액조.주요관찰지표:해마신경원활성,상청액중유산탈경매농도,신경원조망솔.결과:여정상조비교,기여3조신경원활성균명현하강(P<0.05혹0.01);여곡안산손상모형조비교,후초세포조건배양액조、항신경생장인자항체+후초세포조건배양액조신경원활성균명현증고(P<0.01혹0.05),차전자승고폭도대우후자(F=5.85,P<0.05).여정상조비교.기여3조유산탈경매농도급신경원조망솔균명최증고(P<0.05혹0.01);여곡안산손상모형조비교,후초세포조건배양액조、항신경생장인자항체+후초세포조건배양액조유산탈경매농도급신경원조망솔균명현하강(P<0.01혹0.05),차전자하강폭도대우후자(F=5.04,F=5.16,P<0.05).결론:후초세포조건배양액가제고손상해마신경원활성,억제상청액중유산탈경매석방화신경원조망;소제신경생장인자후,이상보호작용감약,제시후초세포조건배양액중존재다충영양물질공동발휘신경보호작용,우이신경생장인자위중.