现代实用医学
現代實用醫學
현대실용의학
MODERN PRACTICAL MEDICINE
2010年
6期
659-660,封3
,共3页
戴晓宇%李克强%乐东海%毛联钢%冯伟云
戴曉宇%李剋彊%樂東海%毛聯鋼%馮偉雲
대효우%리극강%악동해%모련강%풍위운
肝肿瘤%人肝癌细胞株HepG2%自杀基因%逆转录病毒载体
肝腫瘤%人肝癌細胞株HepG2%自殺基因%逆轉錄病毒載體
간종류%인간암세포주HepG2%자살기인%역전록병독재체
目的 构建含大肠杆菌的嘌呤核苷酸磷酸化酶(ePNP)DNA的重组逆转录病毒载体,观察ePNP基因在人肝癌细胞株HepG2的表达.方法 用PCR法获得ePNP亚克隆,构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP,鉴定测序.脂质体法将逆转录病毒载体pDsRed-cPNP转染AmphoPackTM-293包装细胞,获得高滴度病毒并感染HepG2细胞.流式细胞术和荧光显微镜检测红色荧光蛋白(RFP)的表达.RT-PCR法检测ePNPmRNA的表达.ATP-生物荧光体外检测实验(ATP-TCA法)检测不同浓度Fludarabine对HepG2、HepG2/pDsRed和HepG2/ePNP细胞的杀伤作用.结果 克隆的ePNP基因与文献报道一致,成功构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP.病毒包装后滴度为5E+4 TU/mL.表达RFP的HepG2/ePNP阳性细胞率为97.1%.HepG2/ePNP细胞稳定表达ePNP.低浓度Fludarabine对HepGJePNP细胞毒效应明显.结论 成功构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP,并且获得稳定表达ePNP基因的HepG2/ePNP人肝癌细胞株.
目的 構建含大腸桿菌的嘌呤覈苷痠燐痠化酶(ePNP)DNA的重組逆轉錄病毒載體,觀察ePNP基因在人肝癌細胞株HepG2的錶達.方法 用PCR法穫得ePNP亞剋隆,構建重組逆轉錄病毒載體pDsRed-ePNP,鑒定測序.脂質體法將逆轉錄病毒載體pDsRed-cPNP轉染AmphoPackTM-293包裝細胞,穫得高滴度病毒併感染HepG2細胞.流式細胞術和熒光顯微鏡檢測紅色熒光蛋白(RFP)的錶達.RT-PCR法檢測ePNPmRNA的錶達.ATP-生物熒光體外檢測實驗(ATP-TCA法)檢測不同濃度Fludarabine對HepG2、HepG2/pDsRed和HepG2/ePNP細胞的殺傷作用.結果 剋隆的ePNP基因與文獻報道一緻,成功構建重組逆轉錄病毒載體pDsRed-ePNP.病毒包裝後滴度為5E+4 TU/mL.錶達RFP的HepG2/ePNP暘性細胞率為97.1%.HepG2/ePNP細胞穩定錶達ePNP.低濃度Fludarabine對HepGJePNP細胞毒效應明顯.結論 成功構建重組逆轉錄病毒載體pDsRed-ePNP,併且穫得穩定錶達ePNP基因的HepG2/ePNP人肝癌細胞株.
목적 구건함대장간균적표령핵감산린산화매(ePNP)DNA적중조역전록병독재체,관찰ePNP기인재인간암세포주HepG2적표체.방법 용PCR법획득ePNP아극륭,구건중조역전록병독재체pDsRed-ePNP,감정측서.지질체법장역전록병독재체pDsRed-cPNP전염AmphoPackTM-293포장세포,획득고적도병독병감염HepG2세포.류식세포술화형광현미경검측홍색형광단백(RFP)적표체.RT-PCR법검측ePNPmRNA적표체.ATP-생물형광체외검측실험(ATP-TCA법)검측불동농도Fludarabine대HepG2、HepG2/pDsRed화HepG2/ePNP세포적살상작용.결과 극륭적ePNP기인여문헌보도일치,성공구건중조역전록병독재체pDsRed-ePNP.병독포장후적도위5E+4 TU/mL.표체RFP적HepG2/ePNP양성세포솔위97.1%.HepG2/ePNP세포은정표체ePNP.저농도Fludarabine대HepGJePNP세포독효응명현.결론 성공구건중조역전록병독재체pDsRed-ePNP,병차획득은정표체ePNP기인적HepG2/ePNP인간암세포주.
