江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
3期
487-491
,共5页
刘邮洲%罗楚平%刘永锋%陈志谊
劉郵洲%囉楚平%劉永鋒%陳誌誼
류유주%라초평%류영봉%진지의
黏质沙雷氏菌%chiA基因%克隆%表达
黏質沙雷氏菌%chiA基因%剋隆%錶達
점질사뢰씨균%chiA기인%극륭%표체
利用PCR方法从黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)C8-8中克隆到编码几丁质酶的chiA基因,大小为1692bp,推测其编码一条长563个氨基酸的多肽链,分子量约为60900.同源分析研究结果表明从C8-8中克隆的chiA基因序列与黏质沙雷氏菌株141(DQ990373.1)和14041菌株(DQ493896.1)的chiA基因序列相似性最高,达到99％.结构域分析结果表明从C8-8中克隆的chiA基因N末端(23AA)存在典型的信号肽序列,C端存在另外两个结构域,即PKD区(73AA)和几丁质酶催化区(387AA).采用大肠杆菌表达系统重组表达chiA基因,结果表明重组菌株在几丁质诱导培养基上能产生透明的水解圈.采用SDS-PAGE电泳分析,结果表明chiA重组表达产物的相对分子质量约为60000,与预测分子量大小基本一致.初步提纯后,生物活性试验结果表明该重组表达产物能水解几丁质,在几丁质培养基上产生透明的水解圈.
利用PCR方法從黏質沙雷氏菌(Serratia marcescens)C8-8中剋隆到編碼幾丁質酶的chiA基因,大小為1692bp,推測其編碼一條長563箇氨基痠的多肽鏈,分子量約為60900.同源分析研究結果錶明從C8-8中剋隆的chiA基因序列與黏質沙雷氏菌株141(DQ990373.1)和14041菌株(DQ493896.1)的chiA基因序列相似性最高,達到99％.結構域分析結果錶明從C8-8中剋隆的chiA基因N末耑(23AA)存在典型的信號肽序列,C耑存在另外兩箇結構域,即PKD區(73AA)和幾丁質酶催化區(387AA).採用大腸桿菌錶達繫統重組錶達chiA基因,結果錶明重組菌株在幾丁質誘導培養基上能產生透明的水解圈.採用SDS-PAGE電泳分析,結果錶明chiA重組錶達產物的相對分子質量約為60000,與預測分子量大小基本一緻.初步提純後,生物活性試驗結果錶明該重組錶達產物能水解幾丁質,在幾丁質培養基上產生透明的水解圈.
이용PCR방법종점질사뢰씨균(Serratia marcescens)C8-8중극륭도편마궤정질매적chiA기인,대소위1692bp,추측기편마일조장563개안기산적다태련,분자량약위60900.동원분석연구결과표명종C8-8중극륭적chiA기인서렬여점질사뢰씨균주141(DQ990373.1)화14041균주(DQ493896.1)적chiA기인서렬상사성최고,체도99％.결구역분석결과표명종C8-8중극륭적chiA기인N말단(23AA)존재전형적신호태서렬,C단존재령외량개결구역,즉PKD구(73AA)화궤정질매최화구(387AA).채용대장간균표체계통중조표체chiA기인,결과표명중조균주재궤정질유도배양기상능산생투명적수해권.채용SDS-PAGE전영분석,결과표명chiA중조표체산물적상대분자질량약위60000,여예측분자량대소기본일치.초보제순후,생물활성시험결과표명해중조표체산물능수해궤정질,재궤정질배양기상산생투명적수해권.
