食品研究与开发
食品研究與開髮
식품연구여개발
FOOD RESEARCH AND CEVELOPMENT
2012年
7期
127-131
,共5页
王硕%刘昕煜%吴懿娜%杜欣军%朱超%张洁
王碩%劉昕煜%吳懿娜%杜訢軍%硃超%張潔
왕석%류흔욱%오의나%두흔군%주초%장길
西维因%噬菌体展示%重组抗体
西維因%噬菌體展示%重組抗體
서유인%서균체전시%중조항체
在计算机辅助下,设计并合成西维因半抗原,与载体蛋白KLH连接后免疫Balb/C小鼠,经过5次免疫后,最高效价和特异性抑制率分别达到254000和26％；提取免疫后小鼠脾脏总RNA,纯化mRNA后反转录获得cDNA,利用设计的兼并引物获得长度约为400 bp的轻链可变区和重链可变区基因片段,重叠延伸后获得长度约为780 bp的单链抗体基因.经过EcoRI和HindⅢ酶切后,连入T7噬菌体臂,构建西维因特异性的抗体库,抗体库原始滴度为1.74×107pfu.以西维因-OVA为配体对抗体库进行淘选,经过4轮淘选后,利用直接ELISA对获得噬菌体克隆进行特异性检测,西维因对克隆A4-7和A4-16的抑制率分别达到54.1％和66.4％.经过序列测定,2个克隆的轻链可变区分别由108和112个氨基酸构成,重链可变区分别由117和112个氨基酸构成.
在計算機輔助下,設計併閤成西維因半抗原,與載體蛋白KLH連接後免疫Balb/C小鼠,經過5次免疫後,最高效價和特異性抑製率分彆達到254000和26％；提取免疫後小鼠脾髒總RNA,純化mRNA後反轉錄穫得cDNA,利用設計的兼併引物穫得長度約為400 bp的輕鏈可變區和重鏈可變區基因片段,重疊延伸後穫得長度約為780 bp的單鏈抗體基因.經過EcoRI和HindⅢ酶切後,連入T7噬菌體臂,構建西維因特異性的抗體庫,抗體庫原始滴度為1.74×107pfu.以西維因-OVA為配體對抗體庫進行淘選,經過4輪淘選後,利用直接ELISA對穫得噬菌體剋隆進行特異性檢測,西維因對剋隆A4-7和A4-16的抑製率分彆達到54.1％和66.4％.經過序列測定,2箇剋隆的輕鏈可變區分彆由108和112箇氨基痠構成,重鏈可變區分彆由117和112箇氨基痠構成.
재계산궤보조하,설계병합성서유인반항원,여재체단백KLH련접후면역Balb/C소서,경과5차면역후,최고효개화특이성억제솔분별체도254000화26％；제취면역후소서비장총RNA,순화mRNA후반전록획득cDNA,이용설계적겸병인물획득장도약위400 bp적경련가변구화중련가변구기인편단,중첩연신후획득장도약위780 bp적단련항체기인.경과EcoRI화HindⅢ매절후,련입T7서균체비,구건서유인특이성적항체고,항체고원시적도위1.74×107pfu.이서유인-OVA위배체대항체고진행도선,경과4륜도선후,이용직접ELISA대획득서균체극륭진행특이성검측,서유인대극륭A4-7화A4-16적억제솔분별체도54.1％화66.4％.경과서렬측정,2개극륭적경련가변구분별유108화112개안기산구성,중련가변구분별유117화112개안기산구성.
