CAJ | 학술논문

目的构建含人纤溶酶原K5区基因的真核表达载体,转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,观察阳性克隆表达的K5蛋白对人脐静脉内皮细胞株ECV304和MDA-MB-231细胞增殖的影响.方法应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5 cDNA,所得的目的片段与真核表达载体pcDNA3重组,构建重组质粒pcDNA3K5,脂质体法将其转染MDA-MB-231,G418筛选阳性克隆,PCR鉴定,RT-PCR和Western blot检测K5的表达.将鉴定正确的阳性克隆的培养上清作用于ECV304细胞,MTT法检测其增殖情况,并用MTT法检测转染pcDNA3K5对MDA-MB-231细胞增殖的影响.结果构建的重组质粒pcDNA3K5经酶切鉴定、测序正确,将其转染MDA-MB-231后挑取的阳性克隆有3个经PCR鉴定正确,并经RT-PCR和Western blot检测证实K5的表达.阳性克隆的培养上清作用于ECV304细胞后,其存活率降低;转染pcDNA3K5对MDA-MB-231细胞增殖无明显影响.结论应用脂质体法将带有人纤溶酶原信号肽序列的K5 cDNA转染MDA-MB-231细胞后,其分泌产生的有生物学活性的K5,呈现对ECV304细胞增殖的抑制作用,而对MDA-MB-231细胞的生长则无影响.
목적구건함인섬용매원K5구기인적진핵표체재체,전염인유선암세포주MDA-MB-231,관찰양성극륭표체적K5단백대인제정맥내피세포주ECV304화MDA-MB-231세포증식적영향.방법응용PCR장인섬용매원신호태서렬인입K5 cDNA,소득적목적편단여진핵표체재체pcDNA3중조,구건중조질립pcDNA3K5,지질체법장기전염MDA-MB-231,G418사선양성극륭,PCR감정,RT-PCR화Western blot검측K5적표체.장감정정학적양성극륭적배양상청작용우ECV304세포,MTT법검측기증식정황,병용MTT법검측전염pcDNA3K5대MDA-MB-231세포증식적영향.결과구건적중조질립pcDNA3K5경매절감정、측서정학,장기전염MDA-MB-231후도취적양성극륭유3개경PCR감정정학,병경RT-PCR화Western blot검측증실K5적표체.양성극륭적배양상청작용우ECV304세포후,기존활솔강저;전염pcDNA3K5대MDA-MB-231세포증식무명현영향.결론응용지질체법장대유인섬용매원신호태서렬적K5 cDNA전염MDA-MB-231세포후,기분비산생적유생물학활성적K5,정현대ECV304세포증식적억제작용,이대MDA-MB-231세포적생장칙무영향.