CAJ | 학술논문

背景与目的:以肿瘤坏死因子(Tumour necrosis factor-α,TNF-α)前体向分泌型TNF-α转化过程为目标,探讨HL-60细胞中金属蛋白酶(Metalloproteinases,MPs)家族的基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)和解整合素金属蛋白酶(A disintegrin and metalloproteases,ADAM)两亚类成分参与炎症因子分泌的机理以及中药热毒清(Reduqing,RDQ)抗炎保护功效的分子机制.材料与方法:采用细胞毒性-MTT检测法、原位杂交、PAG-底物(明胶)电泳等方法分别检测HL-60、U937和小鼠腹腔巨噬细胞在大肠杆菌内毒素(LPS)及RDQ的作用下,MMPs、ADAM17、TNF-α基因转录水平和酶活性的变化.结果:①LPS刺激后,不同类型细胞的MMPs的表达量及电泳酶谱随刺激时间的延长变弱,而HL-60细胞培养上清的酶谱变化正好相反;②在HL-60细胞中与MMPs相比,ADAM17在前体TNF-α(pro-TNF-α)向分泌型TNF-α(s-TNF-α)转换中起着重要作用;③RDQ在细胞杀伤效应上、在ADAM17 mRNA表达水平上均能明显抑制LPS所诱导的s-TNF-α表达和分泌的增高作用(P＜0.01).结论:①在LPS刺激的TNF-α分泌中,MPs家族的ADAM17起主要作用,而针对解整合素结构域(Disintegrin)的探针对排除MMPs的干扰,真实反映ADAM17 mRNA表达水平更具特异性;②纯中药注射液RDQ的抗炎、解毒作用的靶标之一是拮抗LPS诱导的TACE mRNA活性增加.ADAM17成为炎症机制和治疗研究的新靶标.
배경여목적:이종류배사인자(Tumour necrosis factor-α,TNF-α)전체향분비형TNF-α전화과정위목표,탐토HL-60세포중금속단백매(Metalloproteinases,MPs)가족적기질금속단백매(Matrix metalloproteinases,MMPs)화해정합소금속단백매(A disintegrin and metalloproteases,ADAM)량아류성분삼여염증인자분비적궤리이급중약열독청(Reduqing,RDQ)항염보호공효적분자궤제.재료여방법:채용세포독성-MTT검측법、원위잡교、PAG-저물(명효)전영등방법분별검측HL-60、U937화소서복강거서세포재대장간균내독소(LPS)급RDQ적작용하,MMPs、ADAM17、TNF-α기인전록수평화매활성적변화.결과:①LPS자격후,불동류형세포적MMPs적표체량급전영매보수자격시간적연장변약,이HL-60세포배양상청적매보변화정호상반;②재HL-60세포중여MMPs상비,ADAM17재전체TNF-α(pro-TNF-α)향분비형TNF-α(s-TNF-α)전환중기착중요작용;③RDQ재세포살상효응상、재ADAM17 mRNA표체수평상균능명현억제LPS소유도적s-TNF-α표체화분비적증고작용(P＜0.01).결론:①재LPS자격적TNF-α분비중,MPs가족적ADAM17기주요작용,이침대해정합소결구역(Disintegrin)적탐침대배제MMPs적간우,진실반영ADAM17 mRNA표체수평경구특이성;②순중약주사액RDQ적항염、해독작용적파표지일시길항LPS유도적TACE mRNA활성증가.ADAM17성위염증궤제화치료연구적신파표.