中国热带医学
中國熱帶醫學
중국열대의학
CHINA TROPICAL MEDICINE
2006年
10期
1762-1764
,共3页
郑少江%郑少萍%吴人亮%焦嫦亮%赵霞%姜虹
鄭少江%鄭少萍%吳人亮%焦嫦亮%趙霞%薑虹
정소강%정소평%오인량%초항량%조하%강홍
成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体%基因重组%原核表达
成纖維細胞生長因子Ⅰ型受體%基因重組%原覈錶達
성섬유세포생장인자Ⅰ형수체%기인중조%원핵표체
目的 构建小鼠FGFR-1胞外段基因重组原核表达载体pQE30/FGFR-1,并在大肠杆菌JM109中表达.方法 利用RT-PCR技术,从胚肝中扩增出小鼠的FGFR-1胞外段基因的cDNA,用内切酶消化后插入原核表达质粒pQE30中.经琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定后,体外转化大肠杆菌,用RT-PCR和免疫印迹方法鉴定,同时利用Ni-NTA琼脂柱层析法纯化复性重组蛋白.结果 琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定证实PCR扩增的cDNA及构建的重组原核表达质粒pQE30-FGFR-1正确,并在大肠杆菌中正确表达.经纯化后,进行SDS-PAGE电泳显示得到1条分子量约40kDa的蛋白质条带.结论 成功构建小鼠原核表达载体pQE30/FGFR-1并在大肠杆菌中有效表达,纯化后获得具有活性的重组蛋白质.
目的 構建小鼠FGFR-1胞外段基因重組原覈錶達載體pQE30/FGFR-1,併在大腸桿菌JM109中錶達.方法 利用RT-PCR技術,從胚肝中擴增齣小鼠的FGFR-1胞外段基因的cDNA,用內切酶消化後插入原覈錶達質粒pQE30中.經瓊脂糖凝膠電泳和測序鑒定後,體外轉化大腸桿菌,用RT-PCR和免疫印跡方法鑒定,同時利用Ni-NTA瓊脂柱層析法純化複性重組蛋白.結果 瓊脂糖凝膠電泳和測序鑒定證實PCR擴增的cDNA及構建的重組原覈錶達質粒pQE30-FGFR-1正確,併在大腸桿菌中正確錶達.經純化後,進行SDS-PAGE電泳顯示得到1條分子量約40kDa的蛋白質條帶.結論 成功構建小鼠原覈錶達載體pQE30/FGFR-1併在大腸桿菌中有效錶達,純化後穫得具有活性的重組蛋白質.
목적 구건소서FGFR-1포외단기인중조원핵표체재체pQE30/FGFR-1,병재대장간균JM109중표체.방법 이용RT-PCR기술,종배간중확증출소서적FGFR-1포외단기인적cDNA,용내절매소화후삽입원핵표체질립pQE30중.경경지당응효전영화측서감정후,체외전화대장간균,용RT-PCR화면역인적방법감정,동시이용Ni-NTA경지주층석법순화복성중조단백.결과 경지당응효전영화측서감정증실PCR확증적cDNA급구건적중조원핵표체질립pQE30-FGFR-1정학,병재대장간균중정학표체.경순화후,진행SDS-PAGE전영현시득도1조분자량약40kDa적단백질조대.결론 성공구건소서원핵표체재체pQE30/FGFR-1병재대장간균중유효표체,순화후획득구유활성적중조단백질.
