中国实验动物学报
中國實驗動物學報
중국실험동물학보
ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
2007年
1期
15-20,插2
,共7页
阎新龙%林艳丽%周艳荣%温叶飞%叶华虎%陈红星%邓继先
閻新龍%林豔麗%週豔榮%溫葉飛%葉華虎%陳紅星%鄧繼先
염신룡%림염려%주염영%온협비%협화호%진홍성%산계선
猪%体细胞核移植%Oct4-EGFP%NIH3T3%胚胎发育
豬%體細胞覈移植%Oct4-EGFP%NIH3T3%胚胎髮育
저%체세포핵이식%Oct4-EGFP%NIH3T3%배태발육
目的 探讨Oct4转录因子能否促进鼠-猪异种核移植胚胎的早期发育.方法 RT-PCR获得小鼠Oct4基因,构建pEGFP-N1-Oct4-EGFP融合质粒及pEGFP-Nl-Oct4-EGFP终止质粒,pEGFP-N1质粒为阴性对照,脂质体法转染小鼠NIH3T3细胞,阳性克隆经RT-PCR,荧光显微镜验证正确后,移入去核的猪卵母细胞,观察并记录发育率.结果 未转染的NIH3T3阴性对照组、转染Oct4-EGFP的小鼠NIH3T3细胞和转染pEGFP-N1组均能够支持猪异种核移植胚胎的早期发育,但转染pEGFP-N1-Oct4-EGFP实验组重构胚的卵裂率和8细胞发育率与转染pEGFP-N1组和未转染的NIH3T3组的重构胚发育率差异不显著.结论 NIH3T3细胞能够支持鼠-猪异种核移植胚胎早期发育,Oct4对鼠猪异种核移植胚胎的发育并没有表现出促进作用,可能也受到NIH3T3来源的异种核移植胚胎本身发育率低以及本实验室核移植显微操作水平的限制,具体的机制尚需进一步探讨.
目的 探討Oct4轉錄因子能否促進鼠-豬異種覈移植胚胎的早期髮育.方法 RT-PCR穫得小鼠Oct4基因,構建pEGFP-N1-Oct4-EGFP融閤質粒及pEGFP-Nl-Oct4-EGFP終止質粒,pEGFP-N1質粒為陰性對照,脂質體法轉染小鼠NIH3T3細胞,暘性剋隆經RT-PCR,熒光顯微鏡驗證正確後,移入去覈的豬卵母細胞,觀察併記錄髮育率.結果 未轉染的NIH3T3陰性對照組、轉染Oct4-EGFP的小鼠NIH3T3細胞和轉染pEGFP-N1組均能夠支持豬異種覈移植胚胎的早期髮育,但轉染pEGFP-N1-Oct4-EGFP實驗組重構胚的卵裂率和8細胞髮育率與轉染pEGFP-N1組和未轉染的NIH3T3組的重構胚髮育率差異不顯著.結論 NIH3T3細胞能夠支持鼠-豬異種覈移植胚胎早期髮育,Oct4對鼠豬異種覈移植胚胎的髮育併沒有錶現齣促進作用,可能也受到NIH3T3來源的異種覈移植胚胎本身髮育率低以及本實驗室覈移植顯微操作水平的限製,具體的機製尚需進一步探討.
목적 탐토Oct4전록인자능부촉진서-저이충핵이식배태적조기발육.방법 RT-PCR획득소서Oct4기인,구건pEGFP-N1-Oct4-EGFP융합질립급pEGFP-Nl-Oct4-EGFP종지질립,pEGFP-N1질립위음성대조,지질체법전염소서NIH3T3세포,양성극륭경RT-PCR,형광현미경험증정학후,이입거핵적저란모세포,관찰병기록발육솔.결과 미전염적NIH3T3음성대조조、전염Oct4-EGFP적소서NIH3T3세포화전염pEGFP-N1조균능구지지저이충핵이식배태적조기발육,단전염pEGFP-N1-Oct4-EGFP실험조중구배적란렬솔화8세포발육솔여전염pEGFP-N1조화미전염적NIH3T3조적중구배발육솔차이불현저.결론 NIH3T3세포능구지지서-저이충핵이식배태조기발육,Oct4대서저이충핵이식배태적발육병몰유표현출촉진작용,가능야수도NIH3T3래원적이충핵이식배태본신발육솔저이급본실험실핵이식현미조작수평적한제,구체적궤제상수진일보탐토.
