中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2007年
5期
338-343
,共6页
黄丽君%李慧%刘晗%郭黎媛%高利波%刘新华%蔡望伟%李刚
黃麗君%李慧%劉晗%郭黎媛%高利波%劉新華%蔡望偉%李剛
황려군%리혜%류함%곽려원%고리파%류신화%채망위%리강
凝血因子(ⅩⅢ)(F(ⅩⅢ))内含子%点突变%表达调控
凝血因子(ⅩⅢ)(F(ⅩⅢ))內含子%點突變%錶達調控
응혈인자(ⅩⅢ)(F(ⅩⅢ))내함자%점돌변%표체조공
探讨F(ⅩⅢ)A 基因表达的分子机制.凝胶阻滞实验(EMSA)结果证明,F(ⅩⅢ) A 基因第1内含子5'区的前12碱基与转录因子结合并由此调控基因表达.F(ⅩⅢ) A 基因第1内含子第12位碱基由C突变为A(内含子1(+12)C→A)导致与转录因子结合能力降低.构建不同的荧光素酶表达质粒Luc 1、Luc 2、Luc 3、Luc 4、Luc 5、Luc 6,并转染U937细胞和HepG2细胞.结果显示,如果Luc 5(具有最高表达活性)的内含子1(+12)由C突变为A,启动子活性显著降低.与Luc 5相比,突变后的Luc 5的活性分别下降了52.9%(U937,P＜0.01)和47.6%(HepG2,P＜0.01).将Luc 5与PN3 Sp1共同转染U937细胞和HepG2细胞后,Luc 5的荧光素酶活性分别提高了42.4%(U937,与Luc 5单独转染比较P＜0.01)和54.9%(HepG2,与Luc 5单独转染比较P＜0.01),而突变后的Luc 5(Mut)与PN3 Sp1共同转染则没有明显的改变.表明转录因子Sp1在F(ⅩⅢ) A 基因表达的重要性.这些结果也表明,内含子在F(ⅩⅢ) A 基因表达过程中起重要作用,为遗传性凝血因子(ⅩⅢ)发病机理的研究提供了新的证据.
探討F(ⅩⅢ)A 基因錶達的分子機製.凝膠阻滯實驗(EMSA)結果證明,F(ⅩⅢ) A 基因第1內含子5'區的前12堿基與轉錄因子結閤併由此調控基因錶達.F(ⅩⅢ) A 基因第1內含子第12位堿基由C突變為A(內含子1(+12)C→A)導緻與轉錄因子結閤能力降低.構建不同的熒光素酶錶達質粒Luc 1、Luc 2、Luc 3、Luc 4、Luc 5、Luc 6,併轉染U937細胞和HepG2細胞.結果顯示,如果Luc 5(具有最高錶達活性)的內含子1(+12)由C突變為A,啟動子活性顯著降低.與Luc 5相比,突變後的Luc 5的活性分彆下降瞭52.9%(U937,P＜0.01)和47.6%(HepG2,P＜0.01).將Luc 5與PN3 Sp1共同轉染U937細胞和HepG2細胞後,Luc 5的熒光素酶活性分彆提高瞭42.4%(U937,與Luc 5單獨轉染比較P＜0.01)和54.9%(HepG2,與Luc 5單獨轉染比較P＜0.01),而突變後的Luc 5(Mut)與PN3 Sp1共同轉染則沒有明顯的改變.錶明轉錄因子Sp1在F(ⅩⅢ) A 基因錶達的重要性.這些結果也錶明,內含子在F(ⅩⅢ) A 基因錶達過程中起重要作用,為遺傳性凝血因子(ⅩⅢ)髮病機理的研究提供瞭新的證據.
탐토F(ⅩⅢ)A 기인표체적분자궤제.응효조체실험(EMSA)결과증명,F(ⅩⅢ) A 기인제1내함자5'구적전12감기여전록인자결합병유차조공기인표체.F(ⅩⅢ) A 기인제1내함자제12위감기유C돌변위A(내함자1(+12)C→A)도치여전록인자결합능력강저.구건불동적형광소매표체질립Luc 1、Luc 2、Luc 3、Luc 4、Luc 5、Luc 6,병전염U937세포화HepG2세포.결과현시,여과Luc 5(구유최고표체활성)적내함자1(+12)유C돌변위A,계동자활성현저강저.여Luc 5상비,돌변후적Luc 5적활성분별하강료52.9%(U937,P＜0.01)화47.6%(HepG2,P＜0.01).장Luc 5여PN3 Sp1공동전염U937세포화HepG2세포후,Luc 5적형광소매활성분별제고료42.4%(U937,여Luc 5단독전염비교P＜0.01)화54.9%(HepG2,여Luc 5단독전염비교P＜0.01),이돌변후적Luc 5(Mut)여PN3 Sp1공동전염칙몰유명현적개변.표명전록인자Sp1재F(ⅩⅢ) A 기인표체적중요성.저사결과야표명,내함자재F(ⅩⅢ) A 기인표체과정중기중요작용,위유전성응혈인자(ⅩⅢ)발병궤리적연구제공료신적증거.
