中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2011年
11期
961-963,978
,共4页
顾卉%佟宇鑫%刘彤%李慧%李丹妮%袁正伟
顧卉%佟宇鑫%劉彤%李慧%李丹妮%袁正偉
고훼%동우흠%류동%리혜%리단니%원정위
LMO1%截短突变体%质粒%原核表达
LMO1%截短突變體%質粒%原覈錶達
LMO1%절단돌변체%질립%원핵표체
目的 构建GST-LMO1融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达.方法 以人胎脑文库为模板,用PCR方法法扩增出LMO1基因全长及各个截短突变体,通过BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点分别将其定向插入pGEX-5X-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,并用Western blot方法证实了GST-LMO1全长及各个截短突变体融合蛋白的表达.结论 成功构建了LMO1全长及其截短突变体原核表达载体,并证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为LMO1结构与功能的研究提供了前提基础.
目的 構建GST-LMO1融閤蛋白錶達載體,併在原覈細胞大腸埃希菌(E.coli)中誘導錶達.方法 以人胎腦文庫為模闆,用PCR方法法擴增齣LMO1基因全長及各箇截短突變體,通過BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位點分彆將其定嚮插入pGEX-5X-2載體中,構建原覈錶達質粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突變體,通過酶切電泳鑒定和DNA序列測定正確後,轉入E.coli BL21中,經異丙基硫代β-D半乳糖苷誘導錶達,SDS-PAGE和Western blot鑒定.結果 酶切電泳及測序結果證明,成功構建瞭原覈錶達質粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突變體,併用Western blot方法證實瞭GST-LMO1全長及各箇截短突變體融閤蛋白的錶達.結論 成功構建瞭LMO1全長及其截短突變體原覈錶達載體,併證實瞭其在原覈細胞大腸埃希菌中的錶達,為LMO1結構與功能的研究提供瞭前提基礎.
목적 구건GST-LMO1융합단백표체재체,병재원핵세포대장애희균(E.coli)중유도표체.방법 이인태뇌문고위모판,용PCR방법법확증출LMO1기인전장급각개절단돌변체,통과BamH Ⅰ화EcoR Ⅰ매절위점분별장기정향삽입pGEX-5X-2재체중,구건원핵표체질립pGEX-5X-2-LMO1급기절단돌변체,통과매절전영감정화DNA서렬측정정학후,전입E.coli BL21중,경이병기류대β-D반유당감유도표체,SDS-PAGE화Western blot감정.결과 매절전영급측서결과증명,성공구건료원핵표체질립pGEX-5X-2-LMO1급기절단돌변체,병용Western blot방법증실료GST-LMO1전장급각개절단돌변체융합단백적표체.결론 성공구건료LMO1전장급기절단돌변체원핵표체재체,병증실료기재원핵세포대장애희균중적표체,위LMO1결구여공능적연구제공료전제기출.
