中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2012年
8期
690-694
,共5页
蔡俊龙%杨彬%邓宜红%陈实%罗慕侠%李勤%付永锋%程训佳
蔡俊龍%楊彬%鄧宜紅%陳實%囉慕俠%李勤%付永鋒%程訓佳
채준룡%양빈%산의홍%진실%라모협%리근%부영봉%정훈가
热带剥爪螨%重组变应原%Blot5%蛋白表达%IgE
熱帶剝爪螨%重組變應原%Blot5%蛋白錶達%IgE
열대박조만%중조변응원%Blot5%단백표체%IgE
目的:克隆热带剥爪螨主要变应原Blo t 5基因,表达纯化该蛋白,并检测其免疫活性.方法:提取热带剥爪螨总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Blo t 5编码基因,将其连入原核表达载体pET-19b,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21 Star (DE3) pLysS,IPTG诱导表达后,通过Ni2+亲和层析纯化重组变应原Blo t 5.用Dot blot、Western blot和ELISA等方法检测重组变应原Blo t 5免疫活性.结果:Dot blot和Western blot结果表明重组变应原Blo t 5和热带剥爪螨粗提液都能和Blo t 5鼠单克隆抗体结合.重组变应原Blo t 5检测69份热带剥爪螨过敏患者血清和21份户尘螨过敏患者血清中的特异性IgE,阳性率分别为29.0%和33.3%.结论:表达和纯化了具有与天然蛋白相似的免疫活性的重组热带剥爪螨变应原Blo t 5,可用于热带剥爪螨变应原的标准化,为标准化抗原的临床特异性诊断与治疗奠定基础.
目的:剋隆熱帶剝爪螨主要變應原Blo t 5基因,錶達純化該蛋白,併檢測其免疫活性.方法:提取熱帶剝爪螨總RNA,採用RT-PCR的方法擴增Blo t 5編碼基因,將其連入原覈錶達載體pET-19b,將重組質粒轉化入大腸桿菌BL21 Star (DE3) pLysS,IPTG誘導錶達後,通過Ni2+親和層析純化重組變應原Blo t 5.用Dot blot、Western blot和ELISA等方法檢測重組變應原Blo t 5免疫活性.結果:Dot blot和Western blot結果錶明重組變應原Blo t 5和熱帶剝爪螨粗提液都能和Blo t 5鼠單剋隆抗體結閤.重組變應原Blo t 5檢測69份熱帶剝爪螨過敏患者血清和21份戶塵螨過敏患者血清中的特異性IgE,暘性率分彆為29.0%和33.3%.結論:錶達和純化瞭具有與天然蛋白相似的免疫活性的重組熱帶剝爪螨變應原Blo t 5,可用于熱帶剝爪螨變應原的標準化,為標準化抗原的臨床特異性診斷與治療奠定基礎.
목적:극륭열대박조만주요변응원Blo t 5기인,표체순화해단백,병검측기면역활성.방법:제취열대박조만총RNA,채용RT-PCR적방법확증Blo t 5편마기인,장기련입원핵표체재체pET-19b,장중조질립전화입대장간균BL21 Star (DE3) pLysS,IPTG유도표체후,통과Ni2+친화층석순화중조변응원Blo t 5.용Dot blot、Western blot화ELISA등방법검측중조변응원Blo t 5면역활성.결과:Dot blot화Western blot결과표명중조변응원Blo t 5화열대박조만조제액도능화Blo t 5서단극륭항체결합.중조변응원Blo t 5검측69빈열대박조만과민환자혈청화21빈호진만과민환자혈청중적특이성IgE,양성솔분별위29.0%화33.3%.결론:표체화순화료구유여천연단백상사적면역활성적중조열대박조만변응원Blo t 5,가용우열대박조만변응원적표준화,위표준화항원적림상특이성진단여치료전정기출.
