实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2012年
17期
1351-1354
,共4页
脑源性神经生长因子%氧气剥夺%神经元%自噬%自噬微管相关蛋白轻链3
腦源性神經生長因子%氧氣剝奪%神經元%自噬%自噬微管相關蛋白輕鏈3
뇌원성신경생장인자%양기박탈%신경원%자서%자서미관상관단백경련3
目的 探讨脑源性神经生长因子(BDNF)对胚鼠缺氧神经元是否有保护作用及其机制是否与激活自噬有关.方法 将SD大鼠胚鼠(孕17 ～ 19 d)的大脑皮质神经元在体外进行原代细胞培养,并进行神经元鉴定.培养7～10d,选取生长良好的神经元用于前后两部分实验.1.第一部分随机分为3组,对照组:不加入药物,只作缺氧处理；3-甲基腺嘌呤组(3-MA组):提前加入不同浓度的3-MA后作缺氧处理,依次为5 mmol·L-1 3-MA组、10 mmol·L-1 3-MA组、20 mmol·L-1 3-MA组；BDNF组:提前加入不同浓度的BDNF后作缺氧处理,依次为50μg· L-1 BDNF组、100 μg·L-1 BDNF组、200 μg·L-1 BDNF组.观察不同剂量3- MA、BDNF对缺氧神经元损伤的作用.之后以细胞计数盒-8(CCK-8)测定各组细胞活力,确定干预缺氧神经元的最佳药物浓度.2.第二部分分为3组,对照组:单纯缺氧,不加药物；100 μg·L-1 BDNF组:加入100 μg·L-1BDNF;10 mmol·L-1 3-MA组:加入10 mmol·L-1 3-MA.免疫蛋白印迹法检测3组缺氧神经元在不同缺氧时间点细胞自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达情况,以LC3Ⅱ/actin的相对表达量判断自噬发生的程度.结果 1.免疫荧光鉴定:与未缺氧神经元比较,缺氧神经元突触回缩,细胞网状结构被破坏.2.神经元细胞活力:50 μg·L-1BDNF组缺氧神经元细胞活力最强,100 μg·L-1BDNF组缺氧神经元细胞活力其次(Pa＜0.05)；随3-MA剂量加大,各剂量组神经元活力明显降低.3.免疫印迹:于缺氧1h、3h、5h,100 μg·L-1 BDNF组缺氧神经元的LC3表达量,均较对照组相应时间点明显上调(Pa＜0.05).结论 BDNF通过自噬途径对缺氧损伤神经元起保护作用.
目的 探討腦源性神經生長因子(BDNF)對胚鼠缺氧神經元是否有保護作用及其機製是否與激活自噬有關.方法 將SD大鼠胚鼠(孕17 ～ 19 d)的大腦皮質神經元在體外進行原代細胞培養,併進行神經元鑒定.培養7～10d,選取生長良好的神經元用于前後兩部分實驗.1.第一部分隨機分為3組,對照組:不加入藥物,隻作缺氧處理；3-甲基腺嘌呤組(3-MA組):提前加入不同濃度的3-MA後作缺氧處理,依次為5 mmol·L-1 3-MA組、10 mmol·L-1 3-MA組、20 mmol·L-1 3-MA組；BDNF組:提前加入不同濃度的BDNF後作缺氧處理,依次為50μg· L-1 BDNF組、100 μg·L-1 BDNF組、200 μg·L-1 BDNF組.觀察不同劑量3- MA、BDNF對缺氧神經元損傷的作用.之後以細胞計數盒-8(CCK-8)測定各組細胞活力,確定榦預缺氧神經元的最佳藥物濃度.2.第二部分分為3組,對照組:單純缺氧,不加藥物；100 μg·L-1 BDNF組:加入100 μg·L-1BDNF;10 mmol·L-1 3-MA組:加入10 mmol·L-1 3-MA.免疫蛋白印跡法檢測3組缺氧神經元在不同缺氧時間點細胞自噬微管相關蛋白輕鏈3(LC3)的錶達情況,以LC3Ⅱ/actin的相對錶達量判斷自噬髮生的程度.結果 1.免疫熒光鑒定:與未缺氧神經元比較,缺氧神經元突觸迴縮,細胞網狀結構被破壞.2.神經元細胞活力:50 μg·L-1BDNF組缺氧神經元細胞活力最彊,100 μg·L-1BDNF組缺氧神經元細胞活力其次(Pa＜0.05)；隨3-MA劑量加大,各劑量組神經元活力明顯降低.3.免疫印跡:于缺氧1h、3h、5h,100 μg·L-1 BDNF組缺氧神經元的LC3錶達量,均較對照組相應時間點明顯上調(Pa＜0.05).結論 BDNF通過自噬途徑對缺氧損傷神經元起保護作用.
목적 탐토뇌원성신경생장인자(BDNF)대배서결양신경원시부유보호작용급기궤제시부여격활자서유관.방법 장SD대서배서(잉17 ～ 19 d)적대뇌피질신경원재체외진행원대세포배양,병진행신경원감정.배양7～10d,선취생장량호적신경원용우전후량부분실험.1.제일부분수궤분위3조,대조조:불가입약물,지작결양처리；3-갑기선표령조(3-MA조):제전가입불동농도적3-MA후작결양처리,의차위5 mmol·L-1 3-MA조、10 mmol·L-1 3-MA조、20 mmol·L-1 3-MA조；BDNF조:제전가입불동농도적BDNF후작결양처리,의차위50μg· L-1 BDNF조、100 μg·L-1 BDNF조、200 μg·L-1 BDNF조.관찰불동제량3- MA、BDNF대결양신경원손상적작용.지후이세포계수합-8(CCK-8)측정각조세포활력,학정간예결양신경원적최가약물농도.2.제이부분분위3조,대조조:단순결양,불가약물；100 μg·L-1 BDNF조:가입100 μg·L-1BDNF;10 mmol·L-1 3-MA조:가입10 mmol·L-1 3-MA.면역단백인적법검측3조결양신경원재불동결양시간점세포자서미관상관단백경련3(LC3)적표체정황,이LC3Ⅱ/actin적상대표체량판단자서발생적정도.결과 1.면역형광감정:여미결양신경원비교,결양신경원돌촉회축,세포망상결구피파배.2.신경원세포활력:50 μg·L-1BDNF조결양신경원세포활력최강,100 μg·L-1BDNF조결양신경원세포활력기차(Pa＜0.05)；수3-MA제량가대,각제량조신경원활력명현강저.3.면역인적:우결양1h、3h、5h,100 μg·L-1 BDNF조결양신경원적LC3표체량,균교대조조상응시간점명현상조(Pa＜0.05).결론 BDNF통과자서도경대결양손상신경원기보호작용.
