中华实验和临床感染病杂志（电子版）
中華實驗和臨床感染病雜誌（電子版）
중화실험화림상감염병잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL INFECTIOUS DISEASES(ELECTRONIC VERSION)
2012年
5期
375-380
,共6页
樊万虎%成军%刘小静%张树林%王琦
樊萬虎%成軍%劉小靜%張樹林%王琦
번만호%성군%류소정%장수림%왕기
肝炎病毒X抗原,乙型%结合蛋白%原核细胞
肝炎病毒X抗原,乙型%結閤蛋白%原覈細胞
간염병독X항원,을형%결합단백%원핵세포
目的 应用酵母双杂交及生物信息学技术筛选乙型肝炎病毒X抗原结合蛋白1(HBXBP1)并进行克隆,探讨其在大肠埃希菌BL21中表达及亚细胞定位.方法 应用反转录PCR(RT-PCR)技术,以HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得HBXBP1基因片段,连接到pGEM-T载体,双酶切鉴定及测序正确后克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21,通过IPTG诱导表达以获得HBXBP1融合蛋白,并经SDS-PAGE及Western blot分析证实融合蛋白的特异性;构建HBXBP1基因的绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1-HBXBP1,转染HepG2细胞,24 h后于荧光显微镜下观察表达蛋白的亚细胞定位.结果 RT-PCR扩增获得921 bp的HBXBP1基因片段,插入原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导成功获得约56 kD的重组蛋白,经Western blot分析证实其具有良好的特异性;成功构建HBXBP1基因的绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1-HBXBP1,其表达蛋白定位于细胞质.结论 pET-32a(+)-HBXBP1原核表达载体在大肠埃希菌BL21中诱导表达HBXBP1融合蛋白;HBXBP1基因可表达HBXBP1蛋白且定位于细胞质,为研究HBXBP1蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了一定的理论基础.
目的 應用酵母雙雜交及生物信息學技術篩選乙型肝炎病毒X抗原結閤蛋白1(HBXBP1)併進行剋隆,探討其在大腸埃希菌BL21中錶達及亞細胞定位.方法 應用反轉錄PCR(RT-PCR)技術,以HepG2細胞mRNA為模闆,擴增穫得HBXBP1基因片段,連接到pGEM-T載體,雙酶切鑒定及測序正確後剋隆至原覈錶達載體pET-32a(+)中,轉化大腸埃希菌BL21,通過IPTG誘導錶達以穫得HBXBP1融閤蛋白,併經SDS-PAGE及Western blot分析證實融閤蛋白的特異性;構建HBXBP1基因的綠色熒光蛋白錶達質粒pEGFP-C1-HBXBP1,轉染HepG2細胞,24 h後于熒光顯微鏡下觀察錶達蛋白的亞細胞定位.結果 RT-PCR擴增穫得921 bp的HBXBP1基因片段,插入原覈錶達載體pET-32a(+)中,轉化大腸埃希菌BL21,經IPTG誘導成功穫得約56 kD的重組蛋白,經Western blot分析證實其具有良好的特異性;成功構建HBXBP1基因的綠色熒光蛋白錶達質粒pEGFP-C1-HBXBP1,其錶達蛋白定位于細胞質.結論 pET-32a(+)-HBXBP1原覈錶達載體在大腸埃希菌BL21中誘導錶達HBXBP1融閤蛋白;HBXBP1基因可錶達HBXBP1蛋白且定位于細胞質,為研究HBXBP1蛋白的免疫原性和生物學特性奠定瞭一定的理論基礎.
목적 응용효모쌍잡교급생물신식학기술사선을형간염병독X항원결합단백1(HBXBP1)병진행극륭,탐토기재대장애희균BL21중표체급아세포정위.방법 응용반전록PCR(RT-PCR)기술,이HepG2세포mRNA위모판,확증획득HBXBP1기인편단,련접도pGEM-T재체,쌍매절감정급측서정학후극륭지원핵표체재체pET-32a(+)중,전화대장애희균BL21,통과IPTG유도표체이획득HBXBP1융합단백,병경SDS-PAGE급Western blot분석증실융합단백적특이성;구건HBXBP1기인적록색형광단백표체질립pEGFP-C1-HBXBP1,전염HepG2세포,24 h후우형광현미경하관찰표체단백적아세포정위.결과 RT-PCR확증획득921 bp적HBXBP1기인편단,삽입원핵표체재체pET-32a(+)중,전화대장애희균BL21,경IPTG유도성공획득약56 kD적중조단백,경Western blot분석증실기구유량호적특이성;성공구건HBXBP1기인적록색형광단백표체질립pEGFP-C1-HBXBP1,기표체단백정위우세포질.결론 pET-32a(+)-HBXBP1원핵표체재체재대장애희균BL21중유도표체HBXBP1융합단백;HBXBP1기인가표체HBXBP1단백차정위우세포질,위연구HBXBP1단백적면역원성화생물학특성전정료일정적이론기출.
