遗传学报
遺傳學報
유전학보
ACTA GENETICA SINICA
2001年
6期
493-501
,共9页
刘晓东%孙紫清%张崇本%吴鹤龄
劉曉東%孫紫清%張崇本%吳鶴齡
류효동%손자청%장숭본%오학령
CgA基因%反义RNA%转基因小鼠
CgA基因%反義RNA%轉基因小鼠
CgA기인%반의RNA%전기인소서
为了制作CgA基因反义RNA转基因小鼠,构建了质粒pCAS2C,并把pCAS2C中完整的反义表达框显微注射入小鼠受精卵的雌原核中,随后将注射过DNA的受精卵移植入假孕鼠的输卵管中.假母所产子一代都用p1和p4引物对鼠尾基因组DNA进行PCR检测,选出2只首建鼠(PCR阳性).首建鼠与正常鼠杂交后得到F1代小鼠,经PCR方法筛选出来的阳性F1代鼠雌雄自交产生F2代.为了检测F2代鼠的基因型,将PCR方法鉴定为阳性的F2代小鼠分别与正常小鼠回交.只有回交后所得后代PCR检测结果全为阳性的F2代个体才是转基因纯合鼠.这样分别得到两只转基因首建鼠的纯合个体.转基因小鼠脑总RNA经RT朠CR反应后可产生300bp的产物,证明转基因小鼠中转入的反义基因已经转录.以上结果说明转入的pCAS2C反义表达框已经整合到转基因小鼠的基因组中并遗传给后代,而且已经转录.
為瞭製作CgA基因反義RNA轉基因小鼠,構建瞭質粒pCAS2C,併把pCAS2C中完整的反義錶達框顯微註射入小鼠受精卵的雌原覈中,隨後將註射過DNA的受精卵移植入假孕鼠的輸卵管中.假母所產子一代都用p1和p4引物對鼠尾基因組DNA進行PCR檢測,選齣2隻首建鼠(PCR暘性).首建鼠與正常鼠雜交後得到F1代小鼠,經PCR方法篩選齣來的暘性F1代鼠雌雄自交產生F2代.為瞭檢測F2代鼠的基因型,將PCR方法鑒定為暘性的F2代小鼠分彆與正常小鼠迴交.隻有迴交後所得後代PCR檢測結果全為暘性的F2代箇體纔是轉基因純閤鼠.這樣分彆得到兩隻轉基因首建鼠的純閤箇體.轉基因小鼠腦總RNA經RT朠CR反應後可產生300bp的產物,證明轉基因小鼠中轉入的反義基因已經轉錄.以上結果說明轉入的pCAS2C反義錶達框已經整閤到轉基因小鼠的基因組中併遺傳給後代,而且已經轉錄.
위료제작CgA기인반의RNA전기인소서,구건료질립pCAS2C,병파pCAS2C중완정적반의표체광현미주사입소서수정란적자원핵중,수후장주사과DNA적수정란이식입가잉서적수란관중.가모소산자일대도용p1화p4인물대서미기인조DNA진행PCR검측,선출2지수건서(PCR양성).수건서여정상서잡교후득도F1대소서,경PCR방법사선출래적양성F1대서자웅자교산생F2대.위료검측F2대서적기인형,장PCR방법감정위양성적F2대소서분별여정상소서회교.지유회교후소득후대PCR검측결과전위양성적F2대개체재시전기인순합서.저양분별득도량지전기인수건서적순합개체.전기인소서뇌총RNA경RT영CR반응후가산생300bp적산물,증명전기인소서중전입적반의기인이경전록.이상결과설명전입적pCAS2C반의표체광이경정합도전기인소서적기인조중병유전급후대,이차이경전록.
