中国病毒学
中國病毒學
중국병독학
VIROLOGICA SINICA
2003年
5期
441-445
,共5页
戴凯凡%刘颖%周小云%王芙%段丹丽%吴岚%赵斌%邵一鸣
戴凱凡%劉穎%週小雲%王芙%段丹麗%吳嵐%趙斌%邵一鳴
대개범%류영%주소운%왕부%단단려%오람%조빈%소일명
人免疫缺陷病毒(HIV)I型%gagpol基因%重组痘苗病毒%疫苗株
人免疫缺陷病毒(HIV)I型%gagpol基因%重組痘苗病毒%疫苗株
인면역결함병독(HIV)I형%gagpol기인%중조두묘병독%역묘주
为研制不带筛选标记的HIV活载体疫苗,首先构建含有neo基因和lacZ基因双重筛选标记的pVI75转移质粒,并将HIV-I中国主要流行株B'/C重组株CN54 gagpol基因置于pVI75的启动子pE/L下,构建重组质粒pVI75-Gagpol.重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染鸡胚细胞.前三轮通过G418加压,噬斑纯化,得到既含目的基因又含筛选标记的蓝色重组痘苗病毒;后三轮在无G418选择压力下,筛选只含目的基因而缺失了筛选标记的白色重组痘苗病毒.结果表明筛选到了一株重组病毒,经PCR和Dot blot检测确认该株重组痘苗病毒的neo基因和lacZ基因已丢失;PCR鉴定表明目的基因已插入重组痘苗病毒中;抗体染色和Western blot结果证实该重组病毒能很好地表达目的蛋白.
為研製不帶篩選標記的HIV活載體疫苗,首先構建含有neo基因和lacZ基因雙重篩選標記的pVI75轉移質粒,併將HIV-I中國主要流行株B'/C重組株CN54 gagpol基因置于pVI75的啟動子pE/L下,構建重組質粒pVI75-Gagpol.重組質粒與痘苗病毒天罈株共轉染鷄胚細胞.前三輪通過G418加壓,噬斑純化,得到既含目的基因又含篩選標記的藍色重組痘苗病毒;後三輪在無G418選擇壓力下,篩選隻含目的基因而缺失瞭篩選標記的白色重組痘苗病毒.結果錶明篩選到瞭一株重組病毒,經PCR和Dot blot檢測確認該株重組痘苗病毒的neo基因和lacZ基因已丟失;PCR鑒定錶明目的基因已插入重組痘苗病毒中;抗體染色和Western blot結果證實該重組病毒能很好地錶達目的蛋白.
위연제불대사선표기적HIV활재체역묘,수선구건함유neo기인화lacZ기인쌍중사선표기적pVI75전이질립,병장HIV-I중국주요류행주B'/C중조주CN54 gagpol기인치우pVI75적계동자pE/L하,구건중조질립pVI75-Gagpol.중조질립여두묘병독천단주공전염계배세포.전삼륜통과G418가압,서반순화,득도기함목적기인우함사선표기적람색중조두묘병독;후삼륜재무G418선택압력하,사선지함목적기인이결실료사선표기적백색중조두묘병독.결과표명사선도료일주중조병독,경PCR화Dot blot검측학인해주중조두묘병독적neo기인화lacZ기인이주실;PCR감정표명목적기인이삽입중조두묘병독중;항체염색화Western blot결과증실해중조병독능흔호지표체목적단백.
