解剖科学进展
解剖科學進展
해부과학진전
PROGRESS OF ANATOMICAL SCIENCES
2004年
2期
136-139,143
,共5页
郑德宇%秦书俭%郑国顺%姚素艳
鄭德宇%秦書儉%鄭國順%姚素豔
정덕우%진서검%정국순%요소염
人骨形态发生蛋白-2%骨髓基质细胞%转染
人骨形態髮生蛋白-2%骨髓基質細胞%轉染
인골형태발생단백-2%골수기질세포%전염
目的通过观察转染hBMP-2基因在骨髓基质细胞生物学性状变化和检测hBMP-2基因在受体细胞中表达水平,探讨骨髓基质细胞作为hBMP-2基因受体细胞的可行性.方法应用脂质体介导的方法将携带hBMP-2基因的重组载体PcDNA3-hBMP2导入体外培养的骨髓基质细胞中,用G418筛选获得阳性细胞,分别应用PCR技术、原位杂交技术和ELISA检测目的基因DNA、mRNA和蛋白质的存在与表达状况,并绘制细胞的生长曲线.结果 PCR方法显示实验组可见约360 bp的基因条带,原位杂交方法显示实验组约有15～20%的阳性细胞,ELISA方法显示培养第1～4天时hBMP-2的含量为37ng/3×105细胞,培养第11～14天和第25～28天均约54ng/3×105细胞.转染后阳性细胞的倍增时间和生长时间没有因为目的基因的导入而改变,与正常培养的细胞相比差异不显著.结论骨髓基质细胞可以作为hBMP-2基因的受体细胞,基因表达可分泌hBMP-2蛋白质,可作为骨组织工程学中的种子细胞.
目的通過觀察轉染hBMP-2基因在骨髓基質細胞生物學性狀變化和檢測hBMP-2基因在受體細胞中錶達水平,探討骨髓基質細胞作為hBMP-2基因受體細胞的可行性.方法應用脂質體介導的方法將攜帶hBMP-2基因的重組載體PcDNA3-hBMP2導入體外培養的骨髓基質細胞中,用G418篩選穫得暘性細胞,分彆應用PCR技術、原位雜交技術和ELISA檢測目的基因DNA、mRNA和蛋白質的存在與錶達狀況,併繪製細胞的生長麯線.結果 PCR方法顯示實驗組可見約360 bp的基因條帶,原位雜交方法顯示實驗組約有15～20%的暘性細胞,ELISA方法顯示培養第1～4天時hBMP-2的含量為37ng/3×105細胞,培養第11～14天和第25～28天均約54ng/3×105細胞.轉染後暘性細胞的倍增時間和生長時間沒有因為目的基因的導入而改變,與正常培養的細胞相比差異不顯著.結論骨髓基質細胞可以作為hBMP-2基因的受體細胞,基因錶達可分泌hBMP-2蛋白質,可作為骨組織工程學中的種子細胞.
목적통과관찰전염hBMP-2기인재골수기질세포생물학성상변화화검측hBMP-2기인재수체세포중표체수평,탐토골수기질세포작위hBMP-2기인수체세포적가행성.방법응용지질체개도적방법장휴대hBMP-2기인적중조재체PcDNA3-hBMP2도입체외배양적골수기질세포중,용G418사선획득양성세포,분별응용PCR기술、원위잡교기술화ELISA검측목적기인DNA、mRNA화단백질적존재여표체상황,병회제세포적생장곡선.결과 PCR방법현시실험조가견약360 bp적기인조대,원위잡교방법현시실험조약유15～20%적양성세포,ELISA방법현시배양제1～4천시hBMP-2적함량위37ng/3×105세포,배양제11～14천화제25～28천균약54ng/3×105세포.전염후양성세포적배증시간화생장시간몰유인위목적기인적도입이개변,여정상배양적세포상비차이불현저.결론골수기질세포가이작위hBMP-2기인적수체세포,기인표체가분비hBMP-2단백질,가작위골조직공정학중적충자세포.
