中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2004年
6期
954-959
,共6页
冉延超%王一飞%熊盛%张美英%黄文韬%罗林波%刘秋英
冉延超%王一飛%熊盛%張美英%黃文韜%囉林波%劉鞦英
염연초%왕일비%웅성%장미영%황문도%라림파%류추영
核苷二磷酸激酶%肿瘤抑制蛋白质类
覈苷二燐痠激酶%腫瘤抑製蛋白質類
핵감이린산격매%종류억제단백질류
目的:为提高表达量,简化纯化工艺,获得可用于临床研究的重组人NDPK-A蛋白,构建带有6×His纯化标签的原核表达载体,优化表达条件获得产物高表达并鉴定产物活性.方法:将抑癌基因nm23-HI从质粒pBVNMH1中亚克隆于带有纯化标签的表达载体pQE40中;梯度变化表达条件获得产物高表达;镍离子螯合层析柱纯化目的蛋白;Western blot鉴定产物的免疫原性;HPLC测定产物的激酶活性;鸡胚尿囊膜试验鉴定产物抑制血管新生的生物活性.结果:pQE-40中亚克隆的nm23-HI序列无误;目的蛋白最高表达量可达49.6%;纯化的表达产物能与天然NDPK-A的多克隆抗体特异结合;酶比活为472U/mg;具有抑制鸡胚尿囊膜血管新生的活性.结论:表达质粒pQE-nm23HI能高效表达重组人NDPK-A,纯化工艺简便,产物活性与天然NDPK-A无异.
目的:為提高錶達量,簡化純化工藝,穫得可用于臨床研究的重組人NDPK-A蛋白,構建帶有6×His純化標籤的原覈錶達載體,優化錶達條件穫得產物高錶達併鑒定產物活性.方法:將抑癌基因nm23-HI從質粒pBVNMH1中亞剋隆于帶有純化標籤的錶達載體pQE40中;梯度變化錶達條件穫得產物高錶達;鎳離子螯閤層析柱純化目的蛋白;Western blot鑒定產物的免疫原性;HPLC測定產物的激酶活性;鷄胚尿囊膜試驗鑒定產物抑製血管新生的生物活性.結果:pQE-40中亞剋隆的nm23-HI序列無誤;目的蛋白最高錶達量可達49.6%;純化的錶達產物能與天然NDPK-A的多剋隆抗體特異結閤;酶比活為472U/mg;具有抑製鷄胚尿囊膜血管新生的活性.結論:錶達質粒pQE-nm23HI能高效錶達重組人NDPK-A,純化工藝簡便,產物活性與天然NDPK-A無異.
목적:위제고표체량,간화순화공예,획득가용우림상연구적중조인NDPK-A단백,구건대유6×His순화표첨적원핵표체재체,우화표체조건획득산물고표체병감정산물활성.방법:장억암기인nm23-HI종질립pBVNMH1중아극륭우대유순화표첨적표체재체pQE40중;제도변화표체조건획득산물고표체;얼리자오합층석주순화목적단백;Western blot감정산물적면역원성;HPLC측정산물적격매활성;계배뇨낭막시험감정산물억제혈관신생적생물활성.결과:pQE-40중아극륭적nm23-HI서렬무오;목적단백최고표체량가체49.6%;순화적표체산물능여천연NDPK-A적다극륭항체특이결합;매비활위472U/mg;구유억제계배뇨낭막혈관신생적활성.결론:표체질립pQE-nm23HI능고효표체중조인NDPK-A,순화공예간편,산물활성여천연NDPK-A무이.
