苏州大学学报（医学版）
囌州大學學報（醫學版）
소주대학학보（의학판）
SUZHOU UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE
2005年
5期
780-782,806
,共4页
张维延%马泓冰%徐颖%张学光
張維延%馬泓冰%徐穎%張學光
장유연%마홍빙%서영%장학광
白细胞介素-8%大肠杆菌%表达%纯化
白細胞介素-8%大腸桿菌%錶達%純化
백세포개소-8%대장간균%표체%순화
目的优化重组人IL-8(rhIL-8)大肠杆菌表达及纯化工艺,以便获得高纯度的重组蛋白.方法将已构建好的表达载体转化大肠杆菌HB101,经3-吲哚丙烯酸诱导,在发酵罐中进行表达,比较不同诱导剂浓度、温度、pH值及时间,以获得最佳表达工艺参数.离心收集菌体,超声破壁,收集包涵体和胞浆,其中包涵体经变性、复性处理,与包浆部分合并,经肝素亲和层析柱、阳离子交换柱和凝胶层析柱分离纯化,比较不同的洗脱条件,得到纯品,并对重组蛋白的纯度和生物学活性进行鉴定.结果用大肠杆菌HB101在发酵罐中表达rhIL-8,在30℃、pH为7.0的条件下加入50 mmol/L 3-吲哚丙烯酸,诱导28 h,得到约为100 mg/ml的高表达,其分泌的重组蛋白以包涵体和胞浆的形式存在,经三步层析纯化后,得到高纯度的rhIL-8(纯度>95%),经中性粒细胞趋化实验证实,所获IL-8具有良好的趋化白细胞迁移的作用.结论建立高效表达rhIL-8的原核表达和纯化工艺,所获的纯化IL-8具有良好的生物学活性.
目的優化重組人IL-8(rhIL-8)大腸桿菌錶達及純化工藝,以便穫得高純度的重組蛋白.方法將已構建好的錶達載體轉化大腸桿菌HB101,經3-吲哚丙烯痠誘導,在髮酵罐中進行錶達,比較不同誘導劑濃度、溫度、pH值及時間,以穫得最佳錶達工藝參數.離心收集菌體,超聲破壁,收集包涵體和胞漿,其中包涵體經變性、複性處理,與包漿部分閤併,經肝素親和層析柱、暘離子交換柱和凝膠層析柱分離純化,比較不同的洗脫條件,得到純品,併對重組蛋白的純度和生物學活性進行鑒定.結果用大腸桿菌HB101在髮酵罐中錶達rhIL-8,在30℃、pH為7.0的條件下加入50 mmol/L 3-吲哚丙烯痠,誘導28 h,得到約為100 mg/ml的高錶達,其分泌的重組蛋白以包涵體和胞漿的形式存在,經三步層析純化後,得到高純度的rhIL-8(純度>95%),經中性粒細胞趨化實驗證實,所穫IL-8具有良好的趨化白細胞遷移的作用.結論建立高效錶達rhIL-8的原覈錶達和純化工藝,所穫的純化IL-8具有良好的生物學活性.
목적우화중조인IL-8(rhIL-8)대장간균표체급순화공예,이편획득고순도적중조단백.방법장이구건호적표체재체전화대장간균HB101,경3-신타병희산유도,재발효관중진행표체,비교불동유도제농도、온도、pH치급시간,이획득최가표체공예삼수.리심수집균체,초성파벽,수집포함체화포장,기중포함체경변성、복성처리,여포장부분합병,경간소친화층석주、양리자교환주화응효층석주분리순화,비교불동적세탈조건,득도순품,병대중조단백적순도화생물학활성진행감정.결과용대장간균HB101재발효관중표체rhIL-8,재30℃、pH위7.0적조건하가입50 mmol/L 3-신타병희산,유도28 h,득도약위100 mg/ml적고표체,기분비적중조단백이포함체화포장적형식존재,경삼보층석순화후,득도고순도적rhIL-8(순도>95%),경중성립세포추화실험증실,소획IL-8구유량호적추화백세포천이적작용.결론건립고효표체rhIL-8적원핵표체화순화공예,소획적순화IL-8구유량호적생물학활성.
