中国动物传染病学报
中國動物傳染病學報
중국동물전염병학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY
2010年
3期
51-55
,共5页
吴启进%金亚美%李勉%刘金明%王小波%石火英%林矫矫
吳啟進%金亞美%李勉%劉金明%王小波%石火英%林矯矯
오계진%금아미%리면%류금명%왕소파%석화영%림교교
酵母双杂交技术%抱雌沟蛋白%自激活
酵母雙雜交技術%抱雌溝蛋白%自激活
효모쌍잡교기술%포자구단백%자격활
为筛选与血吸虫抱雌沟蛋白相互作用的因子,本研究以抱雌沟蛋白(gynecophoral canal protein of Schistosoma japonicum,SjGCP)为诱饵蛋白构建了用于酵母双杂交筛选系统的重组质粒.根据日本血吸虫抱雌沟蛋白的基因序列设计引物,经过PCR扩增、酶切回收,与经相应酶切的线性化载体pBGKT7-BD连接构建重组质粒.随后将重组质粒pGBKT7-BD-SjGCP转化酵母菌株,测定融合蛋白BD-SjGCP在酵母菌中的自激活活性、对酵母菌生长的影响及在酵母中的表达情况.结果显示构建的重组诱饵蛋白质粒pGBKT7-BD-SjGCP能够在酵母细胞内正确表达,没有独自激活报告基因表达的活性,且其表达对酵母细胞没有毒性,不影响酵母细胞的生长.可见,重组质粒pGBKT7-BD-SjGCP可用于筛选与血吸虫抱雌沟蛋白相互作用的物质.
為篩選與血吸蟲抱雌溝蛋白相互作用的因子,本研究以抱雌溝蛋白(gynecophoral canal protein of Schistosoma japonicum,SjGCP)為誘餌蛋白構建瞭用于酵母雙雜交篩選繫統的重組質粒.根據日本血吸蟲抱雌溝蛋白的基因序列設計引物,經過PCR擴增、酶切迴收,與經相應酶切的線性化載體pBGKT7-BD連接構建重組質粒.隨後將重組質粒pGBKT7-BD-SjGCP轉化酵母菌株,測定融閤蛋白BD-SjGCP在酵母菌中的自激活活性、對酵母菌生長的影響及在酵母中的錶達情況.結果顯示構建的重組誘餌蛋白質粒pGBKT7-BD-SjGCP能夠在酵母細胞內正確錶達,沒有獨自激活報告基因錶達的活性,且其錶達對酵母細胞沒有毒性,不影響酵母細胞的生長.可見,重組質粒pGBKT7-BD-SjGCP可用于篩選與血吸蟲抱雌溝蛋白相互作用的物質.
위사선여혈흡충포자구단백상호작용적인자,본연구이포자구단백(gynecophoral canal protein of Schistosoma japonicum,SjGCP)위유이단백구건료용우효모쌍잡교사선계통적중조질립.근거일본혈흡충포자구단백적기인서렬설계인물,경과PCR확증、매절회수,여경상응매절적선성화재체pBGKT7-BD련접구건중조질립.수후장중조질립pGBKT7-BD-SjGCP전화효모균주,측정융합단백BD-SjGCP재효모균중적자격활활성、대효모균생장적영향급재효모중적표체정황.결과현시구건적중조유이단백질립pGBKT7-BD-SjGCP능구재효모세포내정학표체,몰유독자격활보고기인표체적활성,차기표체대효모세포몰유독성,불영향효모세포적생장.가견,중조질립pGBKT7-BD-SjGCP가용우사선여혈흡충포자구단백상호작용적물질.
