畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
2期
65-70
,共6页
胡晓静%刘棋%付薇%徐贤坤%熊毅
鬍曉靜%劉棋%付薇%徐賢坤%熊毅
호효정%류기%부미%서현곤%웅의
鹅%γ-干扰素%原核表达%抗病毒活性
鵝%γ-榦擾素%原覈錶達%抗病毒活性
아%γ-간우소%원핵표체%항병독활성
本研究采用RT-PCR方法从培养的鹅外周血淋巴细胞总RNA中成功扩增到鹅IFN-γ基因.将克隆在pMD18-T载体中的鹅IFN-γ基因插入原核表达载体pGEX-6P-1,得到重组质粒pGEX-6P-1 -IFN-γ.重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后作SDS-PAGE分析,得到约43 ku融合表达蛋白特异条带.用GST亲和纯化柱对原核表达产物中目的蛋白进行纯化,得到1.2 mg/L的纯化蛋白.用100TCID50病毒量在鹅副黏病毒( GPMV)/鹅胚成纤维细胞系统上测定表达蛋白的抗病毒活性,观察不同处理组的细胞形态并用RT-PCR方法鉴定,发现表达蛋白稀释倍数小于104可抑制GPMV复制,按照Reed-Muench法计算表达的鹅IFN-γ抗病毒效价为2.0×103 U/mL,表明表达蛋白具有良好的抗病毒活性.
本研究採用RT-PCR方法從培養的鵝外週血淋巴細胞總RNA中成功擴增到鵝IFN-γ基因.將剋隆在pMD18-T載體中的鵝IFN-γ基因插入原覈錶達載體pGEX-6P-1,得到重組質粒pGEX-6P-1 -IFN-γ.重組質粒轉化大腸桿菌BL21,經IPTG誘導後作SDS-PAGE分析,得到約43 ku融閤錶達蛋白特異條帶.用GST親和純化柱對原覈錶達產物中目的蛋白進行純化,得到1.2 mg/L的純化蛋白.用100TCID50病毒量在鵝副黏病毒( GPMV)/鵝胚成纖維細胞繫統上測定錶達蛋白的抗病毒活性,觀察不同處理組的細胞形態併用RT-PCR方法鑒定,髮現錶達蛋白稀釋倍數小于104可抑製GPMV複製,按照Reed-Muench法計算錶達的鵝IFN-γ抗病毒效價為2.0×103 U/mL,錶明錶達蛋白具有良好的抗病毒活性.
본연구채용RT-PCR방법종배양적아외주혈림파세포총RNA중성공확증도아IFN-γ기인.장극륭재pMD18-T재체중적아IFN-γ기인삽입원핵표체재체pGEX-6P-1,득도중조질립pGEX-6P-1 -IFN-γ.중조질립전화대장간균BL21,경IPTG유도후작SDS-PAGE분석,득도약43 ku융합표체단백특이조대.용GST친화순화주대원핵표체산물중목적단백진행순화,득도1.2 mg/L적순화단백.용100TCID50병독량재아부점병독( GPMV)/아배성섬유세포계통상측정표체단백적항병독활성,관찰불동처리조적세포형태병용RT-PCR방법감정,발현표체단백희석배수소우104가억제GPMV복제,안조Reed-Muench법계산표체적아IFN-γ항병독효개위2.0×103 U/mL,표명표체단백구유량호적항병독활성.
