NF-κB/p65特异的RNAi腺病毒载体的构建及其对p65表达的抑制效应
NF-κB/p65특이적RNAi선병독재체적구건급기대p65표체적억제효응
Construction of NF-κB/p65-targeting RNAi combinant adenovirus vector and its suppressive effect on the expression of p65 in ECV304 cells
  • 万方数据
    中华内分泌代谢杂志 중화내분비대사잡지
    CHINESE JOURNAL OF ENDOCRINOLOGY AND METABOLISM
    2007年 4期 363-367 ,共5页

    陈刚%乔玉芳%林旭%姚瑾%林苗%游婷婷%沈晓燕%朱香清%牟伦盼%林丽香

    진강%교옥방%림욱%요근%림묘%유정정%침효연%주향청%모륜반%림려향

    RNA干扰%腺病毒科%基因沉默%NF-κB%ECV304细胞 RNA榦擾%腺病毒科%基因沉默%NF-κB%ECV304細胞
    RNA간우%선병독과%기인침묵%NF-κB%ECV304세포
    目的 构建NF-κB p65亚基特异的RNA干扰(RNAi)腺病毒表达载体,并验证其对p65亚基的基因沉默效应.方法 设计合成三对针对p65 mRNA不同位点的短发夹RNA(shRNA)编码序列,克隆到穿梭载体中,通过体外同源重组将短干扰RNA(siRNA)表达盒转移到腺病毒骨架质粒,构建RNAi腺病毒表达载体;在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑实验法进行病毒滴度测定;腺病毒感染人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞,Western印迹法和免疫细胞化学法验证构建的RNAi腺病毒对p65蛋白表达的抑制效应.结果 成功构建了NF-κB p65亚基特异的RNAi腺病毒表达载体,获得高滴度的腺病毒液;RNAi腺病毒感染ECV304细胞后可以高效抑制p65蛋白的表达,且对p65蛋白表达的抑制作用可持续6 d以上.结论 应用RNAi腺病毒表达载体能有效阻断目的基因的表达.
    목적 구건NF-κB p65아기특이적RNA간우(RNAi)선병독표체재체,병험증기대p65아기적기인침묵효응.방법 설계합성삼대침대p65 mRNA불동위점적단발협RNA(shRNA)편마서렬,극륭도천사재체중,통과체외동원중조장단간우RNA(siRNA)표체합전이도선병독골가질립,구건RNAi선병독표체재체;재HEK293A세포중포장병확증병독、공반실험법진행병독적도측정;선병독감염인제정맥내피세포주ECV304세포,Western인적법화면역세포화학법험증구건적RNAi선병독대p65단백표체적억제효응.결과 성공구건료NF-κB p65아기특이적RNAi선병독표체재체,획득고적도적선병독액;RNAi선병독감염ECV304세포후가이고효억제p65단백적표체,차대p65단백표체적억제작용가지속6 d이상.결론 응용RNAi선병독표체재체능유효조단목적기인적표체.
    원문보기 원문다운로드 사이트로이동
저자의 최근 논문