中华肿瘤杂志
中華腫瘤雜誌
중화종류잡지
CHINESE JOURNAL OF ONCOLOGY
2004年
9期
543-546
,共4页
高艳娥%张菊%陈中灿%宋天保%赵艳%张格林%阎小君
高豔娥%張菊%陳中燦%宋天保%趙豔%張格林%閻小君
고염아%장국%진중찬%송천보%조염%장격림%염소군
人乳头瘤病毒58型%E7基因%基因克隆%荧光偏振%宫颈肿瘤
人乳頭瘤病毒58型%E7基因%基因剋隆%熒光偏振%宮頸腫瘤
인유두류병독58형%E7기인%기인극륭%형광편진%궁경종류
目的检测颈癌组织中人乳头瘤病毒58型(HPV58)并克隆表达其E7基因.方法采用 GP5+/GP6+引物系统扩增58例宫颈癌组织,将荧光偏振(FP)检测技术与模板指导的末端延伸反应(TDI-FP)结合,检测HPV58,确定HPV58感染阳性宫颈癌组织.用特异引物从HPV58阳性标本中扩增HPV58 早期表达蛋白E7基因,将其连入pGEM-T Easy载体,获得克隆重组体HPV58E7-pGEM-T,并测序验证.将E7基因与pRSET-A融合表达载体连接,获得E7表达重组体pRSET-58E7,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG诱导表达.结果 58例宫颈癌标本中,HPV58阳性10例,占52例HPV阳性标本的19.2%.从其中扩增到了HPV58 E7基因并构建了其克隆和表达重组体.其表达重组体经IPTG诱导后,可表达Mr16×103的HPV58 E7 His6融合蛋白,表达量占菌体蛋白的30%.结论欧美国家少见的高危HPV58在中国陕西人宫颈癌组织中并不少见.HPV58 E7重组表达体可在大肠杆菌中高效表达,为HPV58相关肿瘤诊断试剂及疫苗的研制奠定了初步基础.
目的檢測頸癌組織中人乳頭瘤病毒58型(HPV58)併剋隆錶達其E7基因.方法採用 GP5+/GP6+引物繫統擴增58例宮頸癌組織,將熒光偏振(FP)檢測技術與模闆指導的末耑延伸反應(TDI-FP)結閤,檢測HPV58,確定HPV58感染暘性宮頸癌組織.用特異引物從HPV58暘性標本中擴增HPV58 早期錶達蛋白E7基因,將其連入pGEM-T Easy載體,穫得剋隆重組體HPV58E7-pGEM-T,併測序驗證.將E7基因與pRSET-A融閤錶達載體連接,穫得E7錶達重組體pRSET-58E7,轉化大腸桿菌BL21(DE3),併用IPTG誘導錶達.結果 58例宮頸癌標本中,HPV58暘性10例,佔52例HPV暘性標本的19.2%.從其中擴增到瞭HPV58 E7基因併構建瞭其剋隆和錶達重組體.其錶達重組體經IPTG誘導後,可錶達Mr16×103的HPV58 E7 His6融閤蛋白,錶達量佔菌體蛋白的30%.結論歐美國傢少見的高危HPV58在中國陝西人宮頸癌組織中併不少見.HPV58 E7重組錶達體可在大腸桿菌中高效錶達,為HPV58相關腫瘤診斷試劑及疫苗的研製奠定瞭初步基礎.
목적검측경암조직중인유두류병독58형(HPV58)병극륭표체기E7기인.방법채용 GP5+/GP6+인물계통확증58례궁경암조직,장형광편진(FP)검측기술여모판지도적말단연신반응(TDI-FP)결합,검측HPV58,학정HPV58감염양성궁경암조직.용특이인물종HPV58양성표본중확증HPV58 조기표체단백E7기인,장기련입pGEM-T Easy재체,획득극륭중조체HPV58E7-pGEM-T,병측서험증.장E7기인여pRSET-A융합표체재체련접,획득E7표체중조체pRSET-58E7,전화대장간균BL21(DE3),병용IPTG유도표체.결과 58례궁경암표본중,HPV58양성10례,점52례HPV양성표본적19.2%.종기중확증도료HPV58 E7기인병구건료기극륭화표체중조체.기표체중조체경IPTG유도후,가표체Mr16×103적HPV58 E7 His6융합단백,표체량점균체단백적30%.결론구미국가소견적고위HPV58재중국협서인궁경암조직중병불소견.HPV58 E7중조표체체가재대장간균중고효표체,위HPV58상관종류진단시제급역묘적연제전정료초보기출.
