中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2003年
5期
427-430
,共4页
刘胜旺%潘蔚绮%孔宪刚%李广兴%夏春
劉勝旺%潘蔚綺%孔憲剛%李廣興%夏春
류성왕%반위기%공헌강%리엄흥%하춘
原核表达%鸡IL-18融合蛋白%纯化%抗血清
原覈錶達%鷄IL-18融閤蛋白%純化%抗血清
원핵표체%계IL-18융합단백%순화%항혈청
将编码鸡白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达栽体pPROEXTMHT中,构建重组质粒并进行确证性序列测定.然后将重组质粒转化大肠杆菌DH5α并用IPTG于37 C诱导培养.表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,目的蛋白表达量占菌体蛋白的30%.SDS-PAGE和Western blot分析显示,表达的鸡IL-18融合蛋白相对分子质量约为23 000.包涵体被6mol/L盐酸胍裂解后,通过镍离子亲和树脂进行了纯化.用所获得的重组鸡IL-18融合蛋白及其纯化产物经3次肌肉注射豚鼠,制备豚鼠抗鸡IL-18多克隆抗血清,并用琼脂扩散试验多克隆抗血清进行了证明.本试验成功的原核表达、纯化了鸡IL-18融合蛋白,并制备了抗鸡IL-18多克隆抗血清,为下一阶段关于鸡IL-18重组蛋白生物学特性及其应用的研究打下了坚实的基础.
將編碼鷄白細胞介素-18(interleukin-18,IL-18)成熟蛋白的基因亞剋隆至原覈錶達栽體pPROEXTMHT中,構建重組質粒併進行確證性序列測定.然後將重組質粒轉化大腸桿菌DH5α併用IPTG于37 C誘導培養.錶達的融閤蛋白主要以包涵體形式存在,目的蛋白錶達量佔菌體蛋白的30%.SDS-PAGE和Western blot分析顯示,錶達的鷄IL-18融閤蛋白相對分子質量約為23 000.包涵體被6mol/L鹽痠胍裂解後,通過鎳離子親和樹脂進行瞭純化.用所穫得的重組鷄IL-18融閤蛋白及其純化產物經3次肌肉註射豚鼠,製備豚鼠抗鷄IL-18多剋隆抗血清,併用瓊脂擴散試驗多剋隆抗血清進行瞭證明.本試驗成功的原覈錶達、純化瞭鷄IL-18融閤蛋白,併製備瞭抗鷄IL-18多剋隆抗血清,為下一階段關于鷄IL-18重組蛋白生物學特性及其應用的研究打下瞭堅實的基礎.
장편마계백세포개소-18(interleukin-18,IL-18)성숙단백적기인아극륭지원핵표체재체pPROEXTMHT중,구건중조질립병진행학증성서렬측정.연후장중조질립전화대장간균DH5α병용IPTG우37 C유도배양.표체적융합단백주요이포함체형식존재,목적단백표체량점균체단백적30%.SDS-PAGE화Western blot분석현시,표체적계IL-18융합단백상대분자질량약위23 000.포함체피6mol/L염산고렬해후,통과얼리자친화수지진행료순화.용소획득적중조계IL-18융합단백급기순화산물경3차기육주사돈서,제비돈서항계IL-18다극륭항혈청,병용경지확산시험다극륭항혈청진행료증명.본시험성공적원핵표체、순화료계IL-18융합단백,병제비료항계IL-18다극륭항혈청,위하일계단관우계IL-18중조단백생물학특성급기응용적연구타하료견실적기출.
