实验生物学报
實驗生物學報
실험생물학보
ACTA BIOLOGIAE EXPERIMENTLIS SINICA
2004年
2期
133-138
,共6页
侯理理%蒋俶%沈卫英%黄哲平%申庆祥
侯理理%蔣俶%瀋衛英%黃哲平%申慶祥
후리리%장숙%침위영%황철평%신경상
表达 重叠PCR hFSH 重组病毒 昆虫细胞SF9
錶達 重疊PCR hFSH 重組病毒 昆蟲細胞SF9
표체 중첩PCR hFSH 중조병독 곤충세포SF9
为了研究在昆虫细胞中表达重组人卵泡刺激素,我们以人胎盘组织提取的染色体DNA为模板,利用重叠PCR方法扩增出hFSHβ亚基的cDNA的编码区.将此cDNA克隆入核型多角体病毒(AcNPV)非融合蛋白基因表达载体pVLl393,我们得到了表达载体pVLl393-hFSHβ,然后与BaculoGoldTM线性杆状病毒DNA共转染昆虫细胞SF9,经多次扩增后获得高滴度的重组病毒AcNPVhFSHB.将此重组病毒感染昆虫细胞,我们得到了在胞浆中表达的hFSHβ亚基,Western h10t显示分子量大约为21kDa.以重组病毒AcNPV-hFSHB与AcNPV-hCGα一同感染昆虫细胞得到了具有分泌性的重组hFSH异二聚体,在非还原的条件下WesteRN b1ot显示分子量大约为33kDa.
為瞭研究在昆蟲細胞中錶達重組人卵泡刺激素,我們以人胎盤組織提取的染色體DNA為模闆,利用重疊PCR方法擴增齣hFSHβ亞基的cDNA的編碼區.將此cDNA剋隆入覈型多角體病毒(AcNPV)非融閤蛋白基因錶達載體pVLl393,我們得到瞭錶達載體pVLl393-hFSHβ,然後與BaculoGoldTM線性桿狀病毒DNA共轉染昆蟲細胞SF9,經多次擴增後穫得高滴度的重組病毒AcNPVhFSHB.將此重組病毒感染昆蟲細胞,我們得到瞭在胞漿中錶達的hFSHβ亞基,Western h10t顯示分子量大約為21kDa.以重組病毒AcNPV-hFSHB與AcNPV-hCGα一同感染昆蟲細胞得到瞭具有分泌性的重組hFSH異二聚體,在非還原的條件下WesteRN b1ot顯示分子量大約為33kDa.
위료연구재곤충세포중표체중조인란포자격소,아문이인태반조직제취적염색체DNA위모판,이용중첩PCR방법확증출hFSHβ아기적cDNA적편마구.장차cDNA극륭입핵형다각체병독(AcNPV)비융합단백기인표체재체pVLl393,아문득도료표체재체pVLl393-hFSHβ,연후여BaculoGoldTM선성간상병독DNA공전염곤충세포SF9,경다차확증후획득고적도적중조병독AcNPVhFSHB.장차중조병독감염곤충세포,아문득도료재포장중표체적hFSHβ아기,Western h10t현시분자량대약위21kDa.이중조병독AcNPV-hFSHB여AcNPV-hCGα일동감염곤충세포득도료구유분비성적중조hFSH이이취체,재비환원적조건하WesteRN b1ot현시분자량대약위33kDa.
