昆虫学报
昆蟲學報
곤충학보
ACTA ENTOMOLOGICA SINICA
2006年
5期
747-753
,共7页
段云%邓小娟%叶明强%杨婉莹%黄亚东%温硕洋%曹阳
段雲%鄧小娟%葉明彊%楊婉瑩%黃亞東%溫碩洋%曹暘
단운%산소연%협명강%양완형%황아동%온석양%조양
黑腹果蝇%抗真菌肽%原核表达%可溶性表达%抗真菌活性
黑腹果蠅%抗真菌肽%原覈錶達%可溶性錶達%抗真菌活性
흑복과승%항진균태%원핵표체%가용성표체%항진균활성
Drosomycin(Drs)是第1个从黑腹果蝇Drosophila melanogaster体内鉴定发现的昆虫抗真菌肽因子.它对细菌无明显的抗性,但对丝状真菌具有高效广谱的抑杀作用.此外,在黑腹果蝇基因组还存在着Drs的另外6个同系物的基因序列,其中同系物Drosomycin-lC(Drs-lC)的抗真菌谱仅次于Drs.将Drs抗真菌肽基因(Drs)和同系物Drs-lC基因(Drs-lC)进行可溶性表达,对果蔬等农产品防腐保鲜的研究有应用前景.本实验将Drs和Drs-lC分别克隆到硫氧还蛋白(Trx)融合表达载体pThiohis A中,转化宿主菌TOP10,进行可溶性表达,并从诱导表达的菌液起始浓度、IPTG的诱导浓度及诱导时间等方面进行了表达条件的优化.结果表明2种融合蛋白Trx-Drs和Trx-Drs-lC大部分以可溶形式表达,可溶性表达的Trx-Drs在上清液中约占菌体总蛋白的22%.2种融合蛋白的表达产物经Ni-NTA亲和层析得到纯化.生测结果表明,2种融合蛋白分别对8种供试真菌中的5种真菌显示明显的抗性.
Drosomycin(Drs)是第1箇從黑腹果蠅Drosophila melanogaster體內鑒定髮現的昆蟲抗真菌肽因子.它對細菌無明顯的抗性,但對絲狀真菌具有高效廣譜的抑殺作用.此外,在黑腹果蠅基因組還存在著Drs的另外6箇同繫物的基因序列,其中同繫物Drosomycin-lC(Drs-lC)的抗真菌譜僅次于Drs.將Drs抗真菌肽基因(Drs)和同繫物Drs-lC基因(Drs-lC)進行可溶性錶達,對果蔬等農產品防腐保鮮的研究有應用前景.本實驗將Drs和Drs-lC分彆剋隆到硫氧還蛋白(Trx)融閤錶達載體pThiohis A中,轉化宿主菌TOP10,進行可溶性錶達,併從誘導錶達的菌液起始濃度、IPTG的誘導濃度及誘導時間等方麵進行瞭錶達條件的優化.結果錶明2種融閤蛋白Trx-Drs和Trx-Drs-lC大部分以可溶形式錶達,可溶性錶達的Trx-Drs在上清液中約佔菌體總蛋白的22%.2種融閤蛋白的錶達產物經Ni-NTA親和層析得到純化.生測結果錶明,2種融閤蛋白分彆對8種供試真菌中的5種真菌顯示明顯的抗性.
Drosomycin(Drs)시제1개종흑복과승Drosophila melanogaster체내감정발현적곤충항진균태인자.타대세균무명현적항성,단대사상진균구유고효엄보적억살작용.차외,재흑복과승기인조환존재착Drs적령외6개동계물적기인서렬,기중동계물Drosomycin-lC(Drs-lC)적항진균보부차우Drs.장Drs항진균태기인(Drs)화동계물Drs-lC기인(Drs-lC)진행가용성표체,대과소등농산품방부보선적연구유응용전경.본실험장Drs화Drs-lC분별극륭도류양환단백(Trx)융합표체재체pThiohis A중,전화숙주균TOP10,진행가용성표체,병종유도표체적균액기시농도、IPTG적유도농도급유도시간등방면진행료표체조건적우화.결과표명2충융합단백Trx-Drs화Trx-Drs-lC대부분이가용형식표체,가용성표체적Trx-Drs재상청액중약점균체총단백적22%.2충융합단백적표체산물경Ni-NTA친화층석득도순화.생측결과표명,2충융합단백분별대8충공시진균중적5충진균현시명현적항성.
