科技通报
科技通報
과기통보
BULLETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
2007年
1期
52-57,101
,共7页
许健%于涟%李龙%由振强%万旺军%刘岩
許健%于漣%李龍%由振彊%萬旺軍%劉巖
허건%우련%리룡%유진강%만왕군%류암
鸡白细胞介素18%克隆%序列分析%分子进化
鷄白細胞介素18%剋隆%序列分析%分子進化
계백세포개소18%극륭%서렬분석%분자진화
根据鸡白细胞介素18(IL-18)cDNA基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术,从脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的我国地方品种萧山鸡原代鸡脾细胞中扩增并克隆鸡IL-18全长基因(Genbank accession,AY628648).扩增片段全长591 bp,共编码197个氨基酸的前体蛋白,其中含有表达完整功能蛋白所必需的起始密码子和终止密码子.该序列与国外报道的鸡IL-18全长基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性为98.99%,只在引导序列中出现两个氨基酸残基的缺失,分子进化分析表明萧山鸡IL-18基因与火鸡以及家鸭基因形成一个独立的分支.将萧山鸡IL-18成熟蛋白序列插入pGEX-4T-2载体并在E.coli中得到表达,获得45 kD的GST-IL-18融合蛋白,经纯化后用于制备多克隆抗体.本研究对萧山鸡白细胞介素18的全长基因进行了克隆及表达,并对其分子进化进行了分析,为深入研究其功能奠定了基础.
根據鷄白細胞介素18(IL-18)cDNA基因序列設計瞭1對特異性引物,應用RT-PCR技術,從脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的我國地方品種蕭山鷄原代鷄脾細胞中擴增併剋隆鷄IL-18全長基因(Genbank accession,AY628648).擴增片段全長591 bp,共編碼197箇氨基痠的前體蛋白,其中含有錶達完整功能蛋白所必需的起始密碼子和終止密碼子.該序列與國外報道的鷄IL-18全長基因覈苷痠序列及推導的氨基痠序列的同源性為98.99%,隻在引導序列中齣現兩箇氨基痠殘基的缺失,分子進化分析錶明蕭山鷄IL-18基因與火鷄以及傢鴨基因形成一箇獨立的分支.將蕭山鷄IL-18成熟蛋白序列插入pGEX-4T-2載體併在E.coli中得到錶達,穫得45 kD的GST-IL-18融閤蛋白,經純化後用于製備多剋隆抗體.本研究對蕭山鷄白細胞介素18的全長基因進行瞭剋隆及錶達,併對其分子進化進行瞭分析,為深入研究其功能奠定瞭基礎.
근거계백세포개소18(IL-18)cDNA기인서렬설계료1대특이성인물,응용RT-PCR기술,종지다당(lipopolysaccharide,LPS)자격적아국지방품충소산계원대계비세포중확증병극륭계IL-18전장기인(Genbank accession,AY628648).확증편단전장591 bp,공편마197개안기산적전체단백,기중함유표체완정공능단백소필수적기시밀마자화종지밀마자.해서렬여국외보도적계IL-18전장기인핵감산서렬급추도적안기산서렬적동원성위98.99%,지재인도서렬중출현량개안기산잔기적결실,분자진화분석표명소산계IL-18기인여화계이급가압기인형성일개독립적분지.장소산계IL-18성숙단백서렬삽입pGEX-4T-2재체병재E.coli중득도표체,획득45 kD적GST-IL-18융합단백,경순화후용우제비다극륭항체.본연구대소산계백세포개소18적전장기인진행료극륭급표체,병대기분자진화진행료분석,위심입연구기공능전정료기출.
