中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2008年
3期
196-199
,共4页
卞庆松%韩红玉%赵其平%姜连连%董辉%闫晓菲%张建哲%黄兵
卞慶鬆%韓紅玉%趙其平%薑連連%董輝%閆曉菲%張建哲%黃兵
변경송%한홍옥%조기평%강련련%동휘%염효비%장건철%황병
鸡%球虫%毒害艾美球虫%孢子化卵囊%cDNA文库%SMART技术
鷄%毬蟲%毒害艾美毬蟲%孢子化卵囊%cDNA文庫%SMART技術
계%구충%독해애미구충%포자화란낭%cDNA문고%SMART기술
为构建毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA表达文库,用Trizol试剂提取毒害艾美球虫孢子化卵囊总RNA,采用SMART技术,在逆转录酶的作用下将总RNA反转录成第一链cDNA,经LD-PCR扩增合成双链cDNA(ds cDNA).经蛋白酶K消化、Sfi I酶切,过CHROMA SPIN-400TM柱去除小于400 bp的片段,与?TriplEx2TM噬菌体载体连接,用Gigapack ⅢGoldTM载体蛋白包装,构建了cDNA噬菌体表达文库.经测定,原始文库容量为4.72×106pfu/mL,扩增后的文库容量为2.62×1010pfu/mL,重组率为97.5%,插入片段为500～1100 bp.证实,该文库质量良好,为毒害艾美球虫新基因的筛选、克隆及功能研究奠定了基础.
為構建毒害艾美毬蟲孢子化卵囊cDNA錶達文庫,用Trizol試劑提取毒害艾美毬蟲孢子化卵囊總RNA,採用SMART技術,在逆轉錄酶的作用下將總RNA反轉錄成第一鏈cDNA,經LD-PCR擴增閤成雙鏈cDNA(ds cDNA).經蛋白酶K消化、Sfi I酶切,過CHROMA SPIN-400TM柱去除小于400 bp的片段,與?TriplEx2TM噬菌體載體連接,用Gigapack ⅢGoldTM載體蛋白包裝,構建瞭cDNA噬菌體錶達文庫.經測定,原始文庫容量為4.72×106pfu/mL,擴增後的文庫容量為2.62×1010pfu/mL,重組率為97.5%,插入片段為500～1100 bp.證實,該文庫質量良好,為毒害艾美毬蟲新基因的篩選、剋隆及功能研究奠定瞭基礎.
위구건독해애미구충포자화란낭cDNA표체문고,용Trizol시제제취독해애미구충포자화란낭총RNA,채용SMART기술,재역전록매적작용하장총RNA반전록성제일련cDNA,경LD-PCR확증합성쌍련cDNA(ds cDNA).경단백매K소화、Sfi I매절,과CHROMA SPIN-400TM주거제소우400 bp적편단,여?TriplEx2TM서균체재체련접,용Gigapack ⅢGoldTM재체단백포장,구건료cDNA서균체표체문고.경측정,원시문고용량위4.72×106pfu/mL,확증후적문고용량위2.62×1010pfu/mL,중조솔위97.5%,삽입편단위500～1100 bp.증실,해문고질량량호,위독해애미구충신기인적사선、극륭급공능연구전정료기출.
