细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
5期
467-470
,共4页
王超%田拥军%张娥娟%吴洪坤%刘嘉%王宝菊%赵西平%杨东亮
王超%田擁軍%張娥娟%吳洪坤%劉嘉%王寶菊%趙西平%楊東亮
왕초%전옹군%장아연%오홍곤%류가%왕보국%조서평%양동량
鸭乙型肝炎病毒%核心蛋白%原核表达载体%多克隆抗体
鴨乙型肝炎病毒%覈心蛋白%原覈錶達載體%多剋隆抗體
압을형간염병독%핵심단백%원핵표체재체%다극륭항체
目的:构建截短型鸭乙型肝炎病毒(DHBV)核心蛋白的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,制备多克隆抗体.方法:应用基因工程技术将编码截短型DHBV核心蛋白(DH-BeAg 1～214 aa)的基因片段装入原核表达载体pRSET-B内,在宿主菌Rosetm(DE3)pLacI内进行诱导表达,运用Ni-NTA方法纯化目的蛋白.用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附实验(ELISA),Westemblot及免疫组化检测抗体的灵敏度和特异性.结果:成功地构建了含截短型DHBV核心区基因的质粒,并纯化得到了相对分子质量(Mr)约为28 000的目的蛋白,用之免疫BALB/c小鼠获得了高效价的特异性多克隆抗体.结论:获得的重组截短型DHBV核心抗原纯度高,免疫反应性强;获得的多克隆抗体有较高的效价和较好的特异性,为DHBV的检测和研究奠定了实验基础.
目的:構建截短型鴨乙型肝炎病毒(DHBV)覈心蛋白的原覈錶達質粒併在大腸桿菌中錶達,製備多剋隆抗體.方法:應用基因工程技術將編碼截短型DHBV覈心蛋白(DH-BeAg 1～214 aa)的基因片段裝入原覈錶達載體pRSET-B內,在宿主菌Rosetm(DE3)pLacI內進行誘導錶達,運用Ni-NTA方法純化目的蛋白.用純化的重組蛋白免疫BALB/c小鼠製備多剋隆抗體,併採用酶聯免疫吸附實驗(ELISA),Westemblot及免疫組化檢測抗體的靈敏度和特異性.結果:成功地構建瞭含截短型DHBV覈心區基因的質粒,併純化得到瞭相對分子質量(Mr)約為28 000的目的蛋白,用之免疫BALB/c小鼠穫得瞭高效價的特異性多剋隆抗體.結論:穫得的重組截短型DHBV覈心抗原純度高,免疫反應性彊;穫得的多剋隆抗體有較高的效價和較好的特異性,為DHBV的檢測和研究奠定瞭實驗基礎.
목적:구건절단형압을형간염병독(DHBV)핵심단백적원핵표체질립병재대장간균중표체,제비다극륭항체.방법:응용기인공정기술장편마절단형DHBV핵심단백(DH-BeAg 1～214 aa)적기인편단장입원핵표체재체pRSET-B내,재숙주균Rosetm(DE3)pLacI내진행유도표체,운용Ni-NTA방법순화목적단백.용순화적중조단백면역BALB/c소서제비다극륭항체,병채용매련면역흡부실험(ELISA),Westemblot급면역조화검측항체적령민도화특이성.결과:성공지구건료함절단형DHBV핵심구기인적질립,병순화득도료상대분자질량(Mr)약위28 000적목적단백,용지면역BALB/c소서획득료고효개적특이성다극륭항체.결론:획득적중조절단형DHBV핵심항원순도고,면역반응성강;획득적다극륭항체유교고적효개화교호적특이성,위DHBV적검측화연구전정료실험기출.
