首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2008年
6期
737-740
,共4页
王雅梅%李慎涛%温铭杰%孙丽翠%司杨%闫豫东%祁雅慧
王雅梅%李慎濤%溫銘傑%孫麗翠%司楊%閆豫東%祁雅慧
왕아매%리신도%온명걸%손려취%사양%염예동%기아혜
血管内皮细胞生长因子%真核表达载体%NIH3T3细胞系%基因表达
血管內皮細胞生長因子%真覈錶達載體%NIH3T3細胞繫%基因錶達
혈관내피세포생장인자%진핵표체재체%NIH3T3세포계%기인표체
目的 研究人血管内皮细胞生长因子(human VEGF)在体外培养的小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)中的基因转移及表达,为血管化组织工程、缺血性疾病的治疗奠定实验基础.方法 应用脂质体介导的基因转移技术,将含有人VEGF165编码序列的真核表达载体pcDNA/V转染至体外培养的NIH3T3细胞系中.G418筛选出稳定表达重组质粒的细胞克隆,转接于细胞瓶中,培养72 h,同时以G418筛选的peDNA3.1(+)阳性细胞克隆和末转染的NIH3T3细胞为阴性对照,取细胞培养上清及细胞裂解液样品进行Western blotting检测.用细胞免疫组织化学染色检测人VEGF165基因在NIH3T3细胞中的表达情况,不着色者为阴性,细胞胞质着色呈棕黄(褐)色者为阳性.结果 Western blotting结果显示在转染pcDNA/V质粒的NIH3T3细胞培养上清中,可以检测到相对分子质量为22 000的反应条带,与预计的人VEGF165单体蛋白的相对分子质量相符.细胞免疫组织化学染色检测结果显示,转染peDNA/V质粒的NIH3T3细胞呈阳性.结论 人VEGF165能够在NIH3T3细胞中有效表达,并获得了稳定表达人VEGF165基因的NIH3T3细胞株.
目的 研究人血管內皮細胞生長因子(human VEGF)在體外培養的小鼠成纖維細胞(NIH3T3細胞)中的基因轉移及錶達,為血管化組織工程、缺血性疾病的治療奠定實驗基礎.方法 應用脂質體介導的基因轉移技術,將含有人VEGF165編碼序列的真覈錶達載體pcDNA/V轉染至體外培養的NIH3T3細胞繫中.G418篩選齣穩定錶達重組質粒的細胞剋隆,轉接于細胞瓶中,培養72 h,同時以G418篩選的peDNA3.1(+)暘性細胞剋隆和末轉染的NIH3T3細胞為陰性對照,取細胞培養上清及細胞裂解液樣品進行Western blotting檢測.用細胞免疫組織化學染色檢測人VEGF165基因在NIH3T3細胞中的錶達情況,不著色者為陰性,細胞胞質著色呈棕黃(褐)色者為暘性.結果 Western blotting結果顯示在轉染pcDNA/V質粒的NIH3T3細胞培養上清中,可以檢測到相對分子質量為22 000的反應條帶,與預計的人VEGF165單體蛋白的相對分子質量相符.細胞免疫組織化學染色檢測結果顯示,轉染peDNA/V質粒的NIH3T3細胞呈暘性.結論 人VEGF165能夠在NIH3T3細胞中有效錶達,併穫得瞭穩定錶達人VEGF165基因的NIH3T3細胞株.
목적 연구인혈관내피세포생장인자(human VEGF)재체외배양적소서성섬유세포(NIH3T3세포)중적기인전이급표체,위혈관화조직공정、결혈성질병적치료전정실험기출.방법 응용지질체개도적기인전이기술,장함유인VEGF165편마서렬적진핵표체재체pcDNA/V전염지체외배양적NIH3T3세포계중.G418사선출은정표체중조질립적세포극륭,전접우세포병중,배양72 h,동시이G418사선적peDNA3.1(+)양성세포극륭화말전염적NIH3T3세포위음성대조,취세포배양상청급세포렬해액양품진행Western blotting검측.용세포면역조직화학염색검측인VEGF165기인재NIH3T3세포중적표체정황,불착색자위음성,세포포질착색정종황(갈)색자위양성.결과 Western blotting결과현시재전염pcDNA/V질립적NIH3T3세포배양상청중,가이검측도상대분자질량위22 000적반응조대,여예계적인VEGF165단체단백적상대분자질량상부.세포면역조직화학염색검측결과현시,전염peDNA/V질립적NIH3T3세포정양성.결론 인VEGF165능구재NIH3T3세포중유효표체,병획득료은정표체인VEGF165기인적NIH3T3세포주.
