生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2009年
3期
346-352
,共7页
杨江勇%顾建兰%施建华%刘飞%沈勤
楊江勇%顧建蘭%施建華%劉飛%瀋勤
양강용%고건란%시건화%류비%침근
阿尔茨海默病%tau蛋白%O-GlcNAc糖基转移酶%RNA干扰
阿爾茨海默病%tau蛋白%O-GlcNAc糖基轉移酶%RNA榦擾
아이자해묵병%tau단백%O-GlcNAc당기전이매%RNA간우
研究HEK293T细胞中O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)基因表达抑制对与AD密切相关的tau蛋白磷酸化与糖基化修饰的影响.以OGT基因为靶点设计三段siRNA(OGT-siRNA1～3,用脂质体的方法转染OGT-siRNA1～3进入HEK293T细胞,通过RT-PCR检测OGT-siRNA1～3对OGT mRNA的抑制.将pEGFP/OGT与OGT-siRNA1～3共转染HEK293T细胞,24 h后在倒置荧光显微镜下观察各组GFP/OGT的表达,根据GFP/OGT的表达量来评价OGT-siRNA1～3对OGT基因表达的抑制率.将筛选出的具有最佳沉默效果的OGT-siRNA与质粒pCI/tau441共转染HEK293T细胞,48 h后Western blot检测tau蛋白糖基化与磷酸化修饰的变化.OGT-siRNA,在100 nmol/L的终浓度时对OGT基因的抑制效率最高.与Mock组相比,对OGT基因mRNA及蛋白质水平的抑制率分别可达80.0%与51.3%左右.OGT基因表达的下调使tau蛋白糖基化水平下降,而磷酸化水平增高,证实tau蛋白的糖基化负调节其磷酸化,葡萄糖摄入减少或代谢降低可能在AD的发生发展中起关键作用.
研究HEK293T細胞中O-GlcNAc糖基轉移酶(OGT)基因錶達抑製對與AD密切相關的tau蛋白燐痠化與糖基化脩飾的影響.以OGT基因為靶點設計三段siRNA(OGT-siRNA1～3,用脂質體的方法轉染OGT-siRNA1～3進入HEK293T細胞,通過RT-PCR檢測OGT-siRNA1～3對OGT mRNA的抑製.將pEGFP/OGT與OGT-siRNA1～3共轉染HEK293T細胞,24 h後在倒置熒光顯微鏡下觀察各組GFP/OGT的錶達,根據GFP/OGT的錶達量來評價OGT-siRNA1～3對OGT基因錶達的抑製率.將篩選齣的具有最佳沉默效果的OGT-siRNA與質粒pCI/tau441共轉染HEK293T細胞,48 h後Western blot檢測tau蛋白糖基化與燐痠化脩飾的變化.OGT-siRNA,在100 nmol/L的終濃度時對OGT基因的抑製效率最高.與Mock組相比,對OGT基因mRNA及蛋白質水平的抑製率分彆可達80.0%與51.3%左右.OGT基因錶達的下調使tau蛋白糖基化水平下降,而燐痠化水平增高,證實tau蛋白的糖基化負調節其燐痠化,葡萄糖攝入減少或代謝降低可能在AD的髮生髮展中起關鍵作用.
연구HEK293T세포중O-GlcNAc당기전이매(OGT)기인표체억제대여AD밀절상관적tau단백린산화여당기화수식적영향.이OGT기인위파점설계삼단siRNA(OGT-siRNA1～3,용지질체적방법전염OGT-siRNA1～3진입HEK293T세포,통과RT-PCR검측OGT-siRNA1～3대OGT mRNA적억제.장pEGFP/OGT여OGT-siRNA1～3공전염HEK293T세포,24 h후재도치형광현미경하관찰각조GFP/OGT적표체,근거GFP/OGT적표체량래평개OGT-siRNA1～3대OGT기인표체적억제솔.장사선출적구유최가침묵효과적OGT-siRNA여질립pCI/tau441공전염HEK293T세포,48 h후Western blot검측tau단백당기화여린산화수식적변화.OGT-siRNA,재100 nmol/L적종농도시대OGT기인적억제효솔최고.여Mock조상비,대OGT기인mRNA급단백질수평적억제솔분별가체80.0%여51.3%좌우.OGT기인표체적하조사tau단백당기화수평하강,이린산화수평증고,증실tau단백적당기화부조절기린산화,포도당섭입감소혹대사강저가능재AD적발생발전중기관건작용.
