CAJ | 학술논문

背景:脊柱和创伤骨科的重建修复对骨的需求量极大,但现实的供需缺点和矛盾限制了植骨运用,急需找寻一种替代途径.目的:探索骨髓间充质干细胞体外分离培养的最佳实验条件,并观察其生物学特征.设计、时间及地点:细胞水平的体外组织工程实验,于2007-05/2008-05在苏州大学附属儿童医院骨科实验室完成.材料:选择4周龄雄性新两兰大耳白兔,由苏州大学动物中心提供.方法:自股骨大转子及髓腔抽取新西兰大耳白兔骨髓,采用密度梯度离心法获取离心层骨髓单个核细胞,体外接种连续培养观察,原代接种后48 h首次换液,此后每二三天全量换液;待细胞长至90%汇合时,用胰酶和EDTA混合液消化传代.主要观察指标:采用倒置显微镜下进行细胞生长形态观察,四唑盐比色法测定细胞活性并描绘细胞生长曲线:另选择P3代细胞进行成骨条件培养液培养4周,应用Gomori钙钴染色法鉴定成骨分化的标志物--碱性磷酸酶阳性细胞,应用Von-Kossa 改良染色法测定钙节结.结果:分离培养的骨髓间充质干细胞生长形态和增殖活性良好,接种后的细胞由短梭形向长梭形、三角形乃至多角性发展,各代细胞有明显的生长潜伏期、对数增长期和平台期,细胞可以连续培养至P9代.经成骨诱导分化的细胞碱性磷酸酶染色阳性率为93%,矿化结节染色阳性.结论:骨髓间充质干细胞体外分离、扩增简单可行,可以定向诱导为成骨细胞.
배경:척주화창상골과적중건수복대골적수구량겁대,단현실적공수결점화모순한제료식골운용,급수조심일충체대도경.목적:탐색골수간충질간세포체외분리배양적최가실험조건,병관찰기생물학특정.설계、시간급지점:세포수평적체외조직공정실험,우2007-05/2008-05재소주대학부속인동의원골과실험실완성.재료:선택4주령웅성신량란대이백토,유소주대학동물중심제공.방법:자고골대전자급수강추취신서란대이백토골수,채용밀도제도리심법획취리심층골수단개핵세포,체외접충련속배양관찰,원대접충후48 h수차환액,차후매이삼천전량환액;대세포장지90%회합시,용이매화EDTA혼합액소화전대.주요관찰지표:채용도치현미경하진행세포생장형태관찰,사서염비색법측정세포활성병묘회세포생장곡선:령선택P3대세포진행성골조건배양액배양4주,응용Gomori개고염색법감정성골분화적표지물--감성린산매양성세포,응용Von-Kossa 개량염색법측정개절결.결과:분리배양적골수간충질간세포생장형태화증식활성량호,접충후적세포유단사형향장사형、삼각형내지다각성발전,각대세포유명현적생장잠복기、대수증장기화평태기,세포가이련속배양지P9대.경성골유도분화적세포감성린산매염색양성솔위93%,광화결절염색양성.결론:골수간충질간세포체외분리、확증간단가행,가이정향유도위성골세포.