生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
2期
121-125
,共5页
覃晓琳%刘朝奇%唐国慧%金羽%孙俪
覃曉琳%劉朝奇%唐國慧%金羽%孫儷
담효림%류조기%당국혜%금우%손려
Fc-PD-1%真核表达%淋巴细胞增殖
Fc-PD-1%真覈錶達%淋巴細胞增殖
Fc-PD-1%진핵표체%림파세포증식
旨在克隆小鼠PD1胞外区(简称mPD-1)基因,利用真核表达系统表达有活性的分泌型mPD-1蛋白,初步研究其生物学活性.克隆mPD-1基因,将其连入pcDNA3.1(+)/Fc中获得pcDNA3.1(+).Fc/mPD-1重组表达质粒,转化至大肠杆菌DH5α,进行PCR和双酶切鉴定,并送测序.将阳性质粒转染L929细胞,利用RT-PCR和western blotting 方法鉴定mPD-1/L929稳定表达株.利用Alamar Blue法检测分泌的mPD-1蛋白对淋巴细胞增殖的影响,评价其生物学活性.结果显示,成功构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Fc/mPD-1,转染了pcDNA3.1(+)-Fc/mPD-1的L929细胞可将mPD-1蛋白分泌至胞外.Alamar Blue检测结果显示,真核细胞分泌的mPD-1蛋白作用于混合淋巴细胞,与阴性对照相比,可明显促进淋巴细胞的增殖.本试验成功地克隆mPD-1胞外区蛋白,并在L929细胞中得到了分泌型表达.分泌的重组蛋白可有效促进淋巴细胞增殖,为进一步研究其功能和临床应用提供了条件.
旨在剋隆小鼠PD1胞外區(簡稱mPD-1)基因,利用真覈錶達繫統錶達有活性的分泌型mPD-1蛋白,初步研究其生物學活性.剋隆mPD-1基因,將其連入pcDNA3.1(+)/Fc中穫得pcDNA3.1(+).Fc/mPD-1重組錶達質粒,轉化至大腸桿菌DH5α,進行PCR和雙酶切鑒定,併送測序.將暘性質粒轉染L929細胞,利用RT-PCR和western blotting 方法鑒定mPD-1/L929穩定錶達株.利用Alamar Blue法檢測分泌的mPD-1蛋白對淋巴細胞增殖的影響,評價其生物學活性.結果顯示,成功構建重組質粒pcDNA3.1(+)-Fc/mPD-1,轉染瞭pcDNA3.1(+)-Fc/mPD-1的L929細胞可將mPD-1蛋白分泌至胞外.Alamar Blue檢測結果顯示,真覈細胞分泌的mPD-1蛋白作用于混閤淋巴細胞,與陰性對照相比,可明顯促進淋巴細胞的增殖.本試驗成功地剋隆mPD-1胞外區蛋白,併在L929細胞中得到瞭分泌型錶達.分泌的重組蛋白可有效促進淋巴細胞增殖,為進一步研究其功能和臨床應用提供瞭條件.
지재극륭소서PD1포외구(간칭mPD-1)기인,이용진핵표체계통표체유활성적분비형mPD-1단백,초보연구기생물학활성.극륭mPD-1기인,장기련입pcDNA3.1(+)/Fc중획득pcDNA3.1(+).Fc/mPD-1중조표체질립,전화지대장간균DH5α,진행PCR화쌍매절감정,병송측서.장양성질립전염L929세포,이용RT-PCR화western blotting 방법감정mPD-1/L929은정표체주.이용Alamar Blue법검측분비적mPD-1단백대림파세포증식적영향,평개기생물학활성.결과현시,성공구건중조질립pcDNA3.1(+)-Fc/mPD-1,전염료pcDNA3.1(+)-Fc/mPD-1적L929세포가장mPD-1단백분비지포외.Alamar Blue검측결과현시,진핵세포분비적mPD-1단백작용우혼합림파세포,여음성대조상비,가명현촉진림파세포적증식.본시험성공지극륭mPD-1포외구단백,병재L929세포중득도료분비형표체.분비적중조단백가유효촉진림파세포증식,위진일보연구기공능화림상응용제공료조건.
