实验动物科学
實驗動物科學
실험동물과학
LABORATORY ANIMAL SCIENCE
2011年
3期
1-5
,共5页
邹淑梅%于在江%张烨%辛丽%陈永坤%陈禹%陈清轩%舒跃龙
鄒淑梅%于在江%張燁%辛麗%陳永坤%陳禹%陳清軒%舒躍龍
추숙매%우재강%장엽%신려%진영곤%진우%진청헌%서약룡
禽流感病毒H5N1%血凝素%神经氨酸酶%真核酵母表达
禽流感病毒H5N1%血凝素%神經氨痠酶%真覈酵母錶達
금류감병독H5N1%혈응소%신경안산매%진핵효모표체
目的 克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础.方法在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(49～1 587 bp)、pMET A/NA(121～1 200bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性.结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95％以上,EUSA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性.结论本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供了依据.
目的 剋隆、錶達和鑒定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神經氨痠酶基因(neuramidinase,NA)序列,為製備抗體和基因工程疫苗打下基礎.方法在成功剋隆禽流感病毒H5N1全長HA、NA基因併測序的基礎上,將部分基因序列剋隆到錶達載體pMET A上,構建瞭重組錶達質粒pMET A/HA(49～1 587 bp)、pMET A/NA(121～1 200bp),電轉化真覈酵母菌pMAD16,甲醇誘導錶達,利用Ni2+親和層析柱對重組蛋白進行純化,併用Western Blotting和ELISA方法檢測其抗原性.結果重組蛋白在酵母菌中可以高效錶達,SDS-PAGE顯示蛋白錶達後形成瞭二聚體,蛋白純度佔總蛋白的95％以上,EUSA和Western Blotting實驗證實,重組蛋白具有良好的抗原性.結論本研究成功剋隆和錶達瞭禽流感病毒H5N1 HA、NA基因序列,為禽流感病毒H5N1診斷試劑和疫苗的開髮等進一步的研究提供瞭依據.
목적 극륭、표체화감정금류감병독H5N1혈응소기인(hemagglutinin,HA)화신경안산매기인(neuramidinase,NA)서렬,위제비항체화기인공정역묘타하기출.방법재성공극륭금류감병독H5N1전장HA、NA기인병측서적기출상,장부분기인서렬극륭도표체재체pMET A상,구건료중조표체질립pMET A/HA(49～1 587 bp)、pMET A/NA(121～1 200bp),전전화진핵효모균pMAD16,갑순유도표체,이용Ni2+친화층석주대중조단백진행순화,병용Western Blotting화ELISA방법검측기항원성.결과중조단백재효모균중가이고효표체,SDS-PAGE현시단백표체후형성료이취체,단백순도점총단백적95％이상,EUSA화Western Blotting실험증실,중조단백구유량호적항원성.결론본연구성공극륭화표체료금류감병독H5N1 HA、NA기인서렬,위금류감병독H5N1진단시제화역묘적개발등진일보적연구제공료의거.
